СССР
Государственный стандарт от 15 апреля 1981 года № ГОСТ 20264.3-81

ГОСТ 20264.3-81 Препараты ферментные. Методы определения активности пектолитического комплекса (с Изменением N 1)

Принят
Государственным комитетом СССР по стандартам
15 апреля 1981 года
    ГОСТ 20264.3-81
    Группа С09
    МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
    ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ
    Методы определения активности пектолитического комплекса
    Enzyme preparations.
    Methods for determination of pectolytic complex activity
    МКС 07.100.30
    65.120
    ОКСТУ 9291
    Дата введения 1982-07-01
    Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 15 апреля 1981 г. N 1973 дата введения установлена 01.07.82
    Ограничение срока действия снято по протоколу N 2-92 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2-93)
    ВЗАМЕН ГОСТ 20264.3-74
    ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в январе 1987 г. (ИУС 4-87).
    Настоящий стандарт распространяется на ферментные препараты микробного происхождения и устанавливает методы определения активности пектолитического комплекса.
    якорь
    1.МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ
    1.1.Отбор проб - по ГОСТ 20264.0-74.
    1.2.Все весовые определения проводятся на лабораторных весах общего назначения по ГОСТ 24104-88* 1 и 2-го классов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г. Допускается применение других весов с аналогичными техническими и метрологическими характеристиками.
    ________________
    * С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.
    (Введен дополнительно, Изм. N 1).
    якорь
    2.МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ (ПкС) (интерферометрический метод)
    2.1.Сущность метода
    Метод основан на определении пектолитических ферментов при каталитическом расщеплении пектина.
    За единицу пектолитической активности должно быть принято количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 г пектина до продуктов, не осаждаемых сернокислым цинком при проведении гидролиза в строго определенных условиях: температура 30 °С, время гидролиза 1 ч, величина рН реакционной среды 4,0; соотношение фермент-субстрат в реакционной среде, обеспечивающее гидролиз 30%-ного пектина, взятого на реакцию.
    Пектолитическую активность выражают числом указанных единиц в 1 г испытуемого препарата.
    Количество продуктов гидролиза пектина, не осаждаемых сернокислым цинком, определяют на интерферометре.
    2.2.Аппаратура, материалы, реактивы
    Интерферометр типа ИТР-2 или ЛИР-2.
    Мешалка любой марки.
    Прибор для определения рН среды в интервале от 1 до 14 с погрешностью измерения не более 0,05 рН.
    Ультратермостат типа ТС-16А с пределом измерений 40 °С и погрешностью 1% или другой ультратермостат с аналогичными характеристиками.
    Термометры 0-150 °С по ГОСТ 28498-90 с ценой деления 1 °С.
    Пробирки стеклянные диаметром 15-18 мм по ГОСТ 25336-82.
    Стаканчики для взвешивания вместимостью 25-30 см по ГОСТ 25336-82.
    Колбы мерные 2-50, 500-2 (наливные) по ГОСТ 1770-74.
    Стаканы и колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 250, 300, 500 см.
    Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76.
    Фильтры обеззоленные. Синяя лента.
    Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не менее 35% и содержанием основного вещества не менее 70%.
    Сахароза по ГОСТ 5833-75, раствор с массовой долей сахарозы 0,25%.
    Цинк сернокислый по ГОСТ 4174-77, раствор с массовой долей сернокислого цинка 15%.
    Аммиак водный по ГОСТ 3760-79.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
    Примечание. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    2.3.Подготовка к анализу
    2.3.1.Приготовление основного ферментного раствора из очищенных порошкообразных препаратов
    0,1000 г (или 1,0000 г) исследуемого препарата взвешивают с погрешностью не более 0,0001 г в стаканчике вместимостью 25-30 см. Навеску тщательно растирают стеклянной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды. Затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см (500 см), доводят водой до метки и перемешивают. С целью избежания адсорбции фермента на наполнителе необходимо процессы растворения и фильтрации проводить неразрывно: после растворения стандартизованных препаратов раствор сразу же фильтруют через беззольный фильтр. Из фильтрата отбирают определенное количество раствора в зависимости от активности препарата для проведения анализа в соответствии с табл.1.
    Таблица 1
    Количество ед. активности в 1 г препарата (ед. ) Количество раствора, которое необходимо для вторичного разбавления, см Объем, до которого необходимо разбавить взятое количество раствора, см Количество препарата, содержащееся в 10 мл ферментного раствора, взятое на анализ, г
    2-5 Без разведения Без разведения 0,02
    5-10 20 50 0,008
    10-20 10 50 0,004
    20-40 5 50 0,002
    40-100 2,5 50 0,001
    100-200 2,5 100 0,0005
    200-500 2,5 250 0,0002

    2.3.2.Приготовление основного ферментного раствора из поверхностной культуры гриба
    1,00 г измельченной воздушно-сухой культуры гриба взвешивают с погрешностью не более 0,01 г, переносят в стакан вместимостью 250 см, заливают 100 см дистиллированной воды и выдерживают в течение 1 ч при 30 °С при периодическом перемешивании. Полученный ферментный экстракт фильтруют через бумажный фильтр и из фильтрата, в зависимости от активности культуры, в соответствии с табл.2 отбирают определенное количество в колбу вместимостью 50 см и доводят водой до метки. Содержимое перемешивают и используют для определения пектолитической активности.
    Таблица 2
    Количество условных единиц активности в 1 г культуры Количество фильтрата вытяжки, взятое для разбавления, см Количество культуры, содержащееся в 10 см ферментного раствора, взятое на анализ, г
    0,4-1,0 - 0,1
    1,0-2,5 20 0,04
    2,5-5,0 10 0,02
    5,0-10 5 0,01
    Свыше 10 2,5 0,005

    2.3.3.Приготовление раствора с массовой долей пектина 1% (субстрат)
    Навеску пектина, взятую с таким расчетом, чтобы в 250 см раствора было 2,5 г чистого пектина (см. обязательное приложение), тонкой струей всыпают при непрерывном перемешивании на мешалке в коническую колбу вместимостью 300 см, куда предварительно наливают около 130 см дистиллированной воды. Раствор перемешивают в течение 3 ч на мешалке при комнатной температуре. По истечении этого времени в раствор добавляют при перемешивании определенное количество концентрированного раствора аммиака для установления рН 4,0. Затем объем раствора доводят дистиллированной водой до 250 см, тщательно перемешивают и фильтруют через два слоя марли.
    Раствор пектина готовят не менее чем за 4 ч до проведения анализа.
    Раствор пектина можно использовать в течение 2-3 сут при условии хранения в холодильнике.
    2.3.4.Проверка интерферометра
    Интерферометр проверяют раствором сахарозы. В правую секцию кюветы интерферометра с длиной грани 4 см наливают дистиллированную воду, в левую - приготовленный раствор сахарозы.
    Поправочный коэффициент () вычисляют по формуле
    ,
    где 780 - показание прибора;
    - показание прибора при проверке раствором сахарозы.
    2.4.Проведение анализа
    Для анализа берут несколько пробирок диаметром 2 см и высотой 18 см по количеству исследуемых проб. В каждую пробирку наливают по 20 см субстрата и ставят их в термостат с температурой (30±0,2) °С. В термостате пробирки выдерживают в течение 10 мин для того, чтобы растворы приняли постоянную температуру. Затем наливают в каждую по 10 см испытуемого ферментного раствора, предварительно подогретого до 30 °С, содержимое каждой пробирки тщательно перемешивают и оставляют в термостате при 30 °С на 1 ч для проведения гидролиза.
    По истечении этого времени в пробирки с реакционной смесью добавляют по 2 см раствора сернокислого цинка для инактивации фермента и осаждения продуктов гидролиза и вынимают из термостата.
    Содержимое каждой пробирки тщательно перемешивают путем встряхивания не менее 10 раз и фильтруют через фильтр.
    Если фильтрат будет мутным, то его необходимо заново профильтровать через тот же фильтр до получения прозрачного раствора. Полученный раствор является исследуемым.
    Одновременно готовят контрольный раствор. Для этого в пробирку наливают 2 см раствора сернокислого цинка, 10 см исследуемого ферментного раствора и 20 см субстрата.
    Измерение проводят на интерферометре. Для этого исследуемый раствор наливают в левое отделение кюветы интерферометра с длиной грани 4 см, а контрольный раствор в правое отделение и измеряют величину смещения интерференционных полос, возникающую вследствие различия показателей преломления контрольного и исследуемого растворов. Отсчет ведут по шкале барабана прибора.
    Для обеспечения точности анализа необходимо разведение ферментных препаратов подбирать таким образом, чтобы получать показания прибора от 400 до 1250
    .
    2.5.Обработка результатов
    Пектолитическую активность () в ед/г вычисляют по формуле
    ,
    где - показание прибора для данного разведения;
    - масса ферментного препарата, содержащегося в 10 см ферментного раствора, взятого на определение, г;
    0,06425, 19,62 и 1000 - постоянные коэффициенты, полученные при математической обработке экспериментальных данных по изучению зависимости между количеством образующихся продуктов гидролиза пектина в условиях метода и количеством единиц активности фермента, взятого на анализ;
    - поправочный коэффициент.
    За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение активностей, полученных при анализе двух навесок. Из каждой навески делают не менее трех разведений. Допускаемое расхождение между значениями активностей не должно превышать 5%.
    Результат округляют до первого десятичного знака.
    Предел возможных значений погрешности измерений пектолитической активности при доверительной вероятности 0,95 составляет 2,5%.
    2.3.1-2.5.(Измененная редакция, Изм. N 1).
    якорь
    3.МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭКЗОПОЛИГАЛАКТУРОНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ (экзо-ПгС) ПО УВЕЛИЧЕНИЮ КОЛИЧЕСТВА ВОССТАНАВЛИВАЮЩИХ АЛЬДЕГИДНЫХ ГРУПП
    3.1.Сущность метода
    Метод основан на учете количества прогидролизированных связей по увеличению конечных альдегидных групп.
    За единицу экзополигалактуроназной активности принято количество фермента, которое в условиях определения при 30 °С катализирует гидролиз 1 мкэкв. гликозидных связей в молекуле пектовой кислоты за 1 мин.
    Экзополигалактуроназная активность выражается числом указанных единиц в 1 г препарата (или 1 см раствора).
    3.2.Аппаратура, материалы, реактивы
    Шкаф сушильный вакуумный любой марки.
    Ультратермостат типа ТС-16А с пределом измерений 40 °С и погрешностью 1% или другой ультратермостат с аналогичными характеристиками.
    Прибор для определения рН среды в интервале от 1 до 14 с погрешностью измерения не более 0,05 рН.
    Воронка Бюхнера.
    Стаканы и колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 100, 500, 1000 см.
    Термометры 0-150 °С по ГОСТ 28498-90 с ценой деления 1 °С.
    Бюретки любого исполнения, 2-го класса точности вместимостью 25 см по ГОСТ 29251-91.
    Пипетки 2-1-10 и 2-1-25 по ГОСТ 29227-91.
    Бязь по ГОСТ 29298-92*.

    _________________
    * На территории Российской Федерации действует ГОСТ 29298-2005. - Примечание изготовителя базы данных.


    Марля медицинская по ГОСТ 9412-93.
    Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76.
    Сито из проволочной сетки N 025 по ГОСТ 6613-86.
    Кислота пектовая.
    Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87.
    Натрий серноватистокислый по ГОСТ 27068-86.
    Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не менее 35% и содержанием основного вещества не менее 70%.
    Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76, раствор с массовой долей крахмала 1%.
    Натрий углекислый по ГОСТ 83-79, раствор молярной концентрации 1 моль/дм.
    Йод по ГОСТ 4159-79, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.
    Кислота серная по ГОСТ 4204-77, раствор молярной концентрации 2 моль/дм.
    Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77.
    Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, раствор молярной концентрации 0,5 моль/дм.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
    Примечание. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.3.Подготовка к анализу
    3.3.1.Приготовление пектовой кислоты (субстрат)
    30,00 г свекловичного пектина, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, заливают 600 см дистиллированной воды для набухания и растворения, оставляют в холодильнике на ночь. Затем к раствору пектина прибавляют 300 см раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 0,5 моль/дм (0,5 н.) для полного растворения пектина и снижения вязкости. Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через два слоя марли, между которыми проложен слой ваты, и к фильтрату прибавляют еще 300 см раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 0,5 моль/дм (0,5 н.)
    Для омыления раствор оставляют на 1 ч в холодильнике. Затем осаждают пектовую кислоту прибавлением примерно 900 см соляной кислоты. Выпавшую пектовую кислоту сразу же отжимают через бязь, помещают в стакан, заливают 70%-ным этиловым спиртом, тщательно перемешивают, растирая комки, и фильтруют на воронке Бюхнера через бязь. Промывают на воронке сначала 70%-ным этиловым спиртом до отсутствия ионов хлора, а затем 50 см 96%-ным этиловым спиртом.
    Полученную кислоту сушат на воздухе, затем в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре.
    Порошок отсеивают через сито с ячейками 0,25 мм (остаток на сите отбрасывают). Влажность продукта обычно 10-15%
    .
    3.3.2.Приготовление раствора с массовой долей пектовой кислоты 1%
    Навеску пектовой кислоты, взятую с таким расчетом, чтобы в 100 см раствора был 1,0000 г пектовой кислоты, взвешивают с погрешностью не более 0,0001 г, медленно всыпают при тщательном перемешивании в стакан с дистиллированной водой и из бюретки по каплям при перемешивании добавляют раствор гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм (1 н.) для доведения раствора до рН 4,0.
    Полученный раствор пектовой кислоты количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и фильтруют через два слоя марли на воронке Бюхнера. Раствор используют в день приготовления.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.3.3.Приготовление основного раствора ферментного препарата - по пп.2.3.1, 2.3.2 непосредственно перед применением.
    3.4.Проведение анализа
    3.4.1.10 см раствора с массовой долей пектовой кислоты 1% вносят в колбу вместимостью по 100 см и помещают в термостат с температурой 30 °С (303 К).
    Через 10 мин в колбу вводят по 5 см ферментного раствора соответствующего разведения, растворы тщательно перемешивают, отмечают время и оставляют на 10, 20, 30 или 60 мин (в зависимости от ферментативной активности) для проведения гидролиза.
    По истечении этого времени в эти же колбы добавляют по 1,8 см раствора углекислого натрия и по 10 см раствора йода.
    3.4.2.Для проведения анализа ферментных препаратов, величина активности которых неизвестна, необходимо взять 50 см раствора субстрата и от 1 до 25 см ферментного раствора (общий объем реакционной смеси 75 см). Из этой реакционной смеси каждые 5-10 мин отбирают пробы по 15 см в колбы, куда предварительно налито 1,8 см раствора углекислого натрия.
    3.4.3.Растворы тщательно перемешивают, закрывают стеклянными пробками и оставляют стоять 20 мин в защищенном от света месте. Затем вводят 2 см раствора серной кислоты, интенсивно перемешивают и оттитровывают избыток йода раствора серноватистокислого натрия молярной концентрации 0,025 моль/дм (0,05 н.) в присутствии крахмала, а результаты титрования выражают в см раствора серноватистокислого натрия молярной концентрации 0,05 моль/дм (0,1 н.).
    Одновременно ставят контрольный опыт с таким же количеством всех реагентов, только ферментный раствор вводят после добавления углекислого натрия непосредственно перед добавлением раствора йода.
    Разность при титровании между контролем и опытом должна быть от 0,5 до 2,5 см.
    3.5.Обработка результатов
    Экзополигалактуроназную активность () в ед/г вычисляют по формуле
    ,
    где 51,3 - число микроэквивалентов альдегидных групп, соответствующих 1 см раствора йода (или гипосульфита);
    - количество раствора йода, израсходованное на окисление образовавшихся при гидролизе альдегидных групп (находят по удвоенной разности титрований раствором серноватистокислого натрия молярной концентрации 0,025 моль/дм (0,05 н.) контрольной и опытной проб), см;
    - время гидролиза, мин;
    - количество препарата в пробе, израсходованное на титрование, г.
    Для обеспечения точности анализа необходимо разведение ферментных препаратов подбирать таким образом, чтобы гидролиз пектовой кислоты не превышал 20%.
    Гидролиз пектовой кислоты () в процентах вычисляют по формуле
    ,
    где - количество раствора йода, израсходованное на окисление образовавшихся при гидролизе альдегидных групп, см;
    9,03 - количество пектовой кислоты, соответствующее 1 см раствора йода, мг;
    - количество пектовой кислоты в реакционной смеси, мг;
    100 - коэффициент перевода в проценты.
    За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение активностей, полученных при анализе двух навесок. Из каждой навески делают не менее трех разведений. Допускаемое расхождение между значениями активностей не должно превышать 5%.
    Результат округляют до первого десятичного знака.
    Предел возможных значений погрешности измерений экзополигалактуроназной активности при доверительной вероятности 0,95 составляет 5%.
    3.4.1-3.5.(Измененная редакция, Изм. N 1).
    Разд.4. (Исключен, Изм. N 1).
    якорь
    5.МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТИНЭСТЕРАЗНОЙ АКТИВНОСТИ (ПэС)
    5.1.Сущность метода
    Метод основан на гидролизе раствора пектина исследуемым ферментным препаратом с последующим определением освободившихся в результате гидролиза карбоксильных групп.
    Пектинэстеразная активность характеризует способность фермента катализировать гидролиз сложноэфирных связей в молекуле пектина с образованием метилового спирта и свободных карбоксильных групп.
    За единицу активности пектинэстеразы принято количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 мкэкв сложноэфирных связей в молекуле пектина за 1 мин при 30 °С.
    Пектинэстеразную активность () выражают числом указанных единиц в 1 г (или 1 см) исследуемого препарата.
    Определяемая величина пектинэстеразной активности находится в непосредственной зависимости от степени этерификации пектина.
    Сравнимые результаты при работе с различными субстратами можно получить только при пересчете полученных данных на субстрат со 100%-ной степенью метоксилирования.
    5.2.Аппаратура, материалы, реактивы
    Прибор для определения рН среды в интервале от 1 до 14 с погрешностью измерения не более 0,05 рН.
    Мешалка любой марки.
    Ультратермостат типа ТС-16А с пределом измерений 40 °С и погрешностью 1% или другой ультратермостат с аналогичными характеристиками.
    Воронка Бюхнера.
    Стаканчики для взвешивания вместимостью 25-30 см по ГОСТ 25336-82.
    Стаканы и колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 50, 200, 250, 300 см.
    Колбы мерные 2-50, 100-2 (наливные) по ГОСТ 1770-74.
    Пипетка 2-1-10, 20, 100 по ГОСТ 29227-91.
    Микробюретка.
    Марля медицинская по ГОСТ 9412-93.
    Баня водяная.
    Вата медицинская по ГОСТ 5556-81.
    Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не менее 80% и содержанием пектина не менее 70%.
    Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.).
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
    Примечание. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    5.3.Подготовка к анализу
    5.3.1.Приготовление раствора с массовой долей пектина 1% (субстрат)
    Навеску пектина, взятую с таким расчетом, чтобы в 100 см раствора был 1,0000 г пектина (см. приложение), взвешивают с погрешностью не более 0,0001 г. Затем медленно всыпают при непрерывном перемешивании на мешалке в стакан с 70 мл дистиллированной воды и оставляют на 2 ч при комнатной температуре для набухания и растворения, после чего помещают на ночь в холодильник.
    На следующий день раствор нагревают до 20 °С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют через два слоя марли с ватой на воронке Бюхнера. Раствор можно использовать в течение 2 сут при условии его хранения в холодильнике.
    5.3.2.Приготовление основного раствора ферментного препарата из очищенных порошкообразных препаратов
    0,5000 г исследуемого ферментного препарата взвешивают на аналитических весах с погрешностью не более 0,0001 г, тщательно растирают стеклянной палочкой в небольшом количестве дистиллированной воды, затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Раствор фильтруют и используют в день приготовления.
    5.3.3.Приготовление основного раствора ферментного препарата из поверхностной культуры гриба
    5,00 г измельченной культуры гриба, взвешенной с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 200-300 см, приливают пипеткой 100 см дистиллированной воды и настаивают 1 ч при комнатной температуре, перемешивая через каждые 10 мин, затем раствор фильтруют через складчатый фильтр.
    5.3.1-5.3.3.(Измененная редакция, Изм. N 1).
    5.3.4.Приготовление инактивированного ферментного раствора
    Для инактивации фермента, применяемого в контрольном опыте, берут 25 см основного ферментного раствора, помещают его в колбу вместимостью 50 см, закрывают пробкой с воздушным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане 1 ч.
    5.4.Проведение анализа
    В стаканы вместимостью по 50 см помещают по 20 см раствора пектина, накрывают часовым стеклом и ставят с промежутками в 15 мин в термостат при температуре 30 °С. Через 15 мин в два стакана прибавляют по 10 см ферментного раствора, а в другие по 10 см раствора инактивированного фермента.
    Общий объем реакционной смеси всегда равен 30 см. Если для анализа берут менее 10 см ферментного раствора, то недостающий объем дополняют дистиллированной водой, которую вводят перед добавлением ферментного раствора.
    Через час после введения фермента пробу вынимают из термостата и быстро титруют из микробюретки раствором гидроокиси натрия до рН 7,5, используя для этой цели потенциометр. Разность между контролем и опытом при титровании должна быть от 0,5 до 1,5.
    5.5.Обработка результатов
    Пектинэстеразную активность () в ед/г вычисляют по формуле
    ,
    где - количество раствора гидроокиси натрия, необходимое для титрования освободившихся в результате действия фермента карбоксильных групп (находят по разности между количеством гидроокиси натрия, израсходованным на титрование опытного и контрольного растворов), см;
    100 - число микроэквивалентов прогидролизованных сложноэфирных связей, соответствующее 1 см 0,1 н. раствора гидроокиси натрия;
    - время гидролиза, мин;
    - масса ферментного препарата, взятого для испытания, г;
    - степень этерификации пектина, используемого в качестве субстрата;
    100 - степень этерификации пектина, на которой ведется расчет.
    За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение активностей, полученных при анализе двух навесок. Из каждой навески делают не менее трех разведений. Допускаемое расхождение между значениями активностей не должно превышать 5%.
    Результат округляют до первого десятичного знака.
    Предел возможных значений погрешности измерений пектинэстеразной активности при доверительной вероятности 0,95 составляет 5%.
    якорь
    ПРИЛОЖЕНИЕ (обязательное). МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТИНА (кальцийпектатный метод)
    ПРИЛОЖЕНИЕ
    Обязательное
    МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТИНА
    (кальцийпектатный метод)
    1.Сущность метода
    Метод основан на получении соли пектана кальция в виде осадка.
    2.Аппаратура, материалы, реактивы
    Шкаф сушильный любой марки, обеспечивающий нагрев до 105 °С.
    Мешалка любой марки.
    Эксикатор по ГОСТ 25336-82.
    Колбы мерные 1-100-2 или 2-100-2 (наливные) по ГОСТ 1770-74.
    Пипетка 2-1-20 по ГОСТ 29227-91.
    Цилиндр любого исполнения вместимостью 100 см по ГОСТ 1770-74.
    Стаканчики для взвешивания любого типа вместимостью 25-30 см по ГОСТ 25336-82.
    Фильтры обеззоленные. Синяя лента.
    Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не менее 30% и содержанием основного вещества не менее 70%.
    Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.).
    Кислота уксусная по ГОСТ 61-75, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм (1 н.).
    Кальций хлористый по ГОСТ 4161-77, раствор молярной концентрации 1 моль/дм (2 н.).
    Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75, раствор с массовой долей серебра 1%.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
    Примечание. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.Проведение анализа
    0,150 г исследуемого свекловичного пектина, взвешенного на аналитических весах с погрешностью не более 0,002 г, растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды при постоянном перемешивании на мешалке, затем количественно переносят в колбу вместимостью 100 см, доводят дистиллированной водой до метки и оставляют до получения однородного раствора.
    Затем берут 20 см этого раствора в колбу и к ним прибавляют 100 см раствора гидроокиси натрия. Смесь для полного омыления пектина в пектовую кислоту оставляют на 7 ч (можно на ночь). Затем прибавляют 50 см 1 н. раствора уксусной кислоты, а через 5 мин 50 см раствора хлористого кальция и оставляют на 1 ч.
    После этого раствор кипятят 5 мин и фильтруют через обеззоленный фильтр, высушенный до постоянной массы. Осадок пектата кальция промывают горячей дистиллированной водой до исчезновения ионов хлора (реакция с раствором азотнокислого серебра).
    После промывки осадок с фильтра помещают в бюксу и высушивают при 105 °С до постоянной массы.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    4.Обработка результатов
    Количество пектина () в граммах, взятое на омыление, вычисляют по формуле
    ,
    где - масса пектина, взятая для приготовления раствора, г;
    - объем исходного раствора пектина, см;
    - объем пектина, взятый на омыление, см.
    По разности масс между фильтром и осадком и фильтром без осадка определяют содержание пектата кальция.
    Массовую долю пектина () в процентах вычисляют по формуле
    ,
    где - масса осадка пектата кальция, г;
    - количество пектина, взятого на омыление, г;
    0,92 - пересчетный коэффициент, учитывающий содержание кальция в осадке;
    100 - переводной коэффициент для выражения результатов, %.
    За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение пектина, полученное при анализе трех навесок пектина, допускаемое расхождение между ними не должно превышать 5%.
    Результат округляют до второго десятичного знака.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).