СССР
Государственный стандарт от 01 июля 1987 года № ГОСТ 26968-86

ГОСТ 26968-86 Сахар. Методы микробиологического анализа (с Изменением N 1)

Принят
Государственным комитетом СССР по стандартам
01 августа 1986 года
    ГОСТ 26968-86
    Группа Н49
    МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
    САХАР
    Методы микробиологического анализа
    Sugar. Methods of microbiological analysis
    ОКСТУ 9109
    Дата введения 1987-07-01
    ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 1 августа 1986 г. N 2321
    Ограничение срока действия снято по протоколу N 2-92 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2-93)
    ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в апреле 1995 г. (ИУС 7-95)
    Настоящий стандарт распространяется на сахар-песок, сахар-рафинад, рафинированный сахар-песок и жидкий сахар и устанавливает методы определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, количества дрожжей и плесневых грибов.
    Методы основаны на высеве определенного количества раствора сахара в агаризованную питательную среду, выращивании посевов, подсчете всех выросших видимых колоний, а для дрожжей и плесневых грибов - колоний, типичных по макро- или микроскопической морфологии и определении микроорганизмов в 1 г сахара.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    1.ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
    1.1.Отбор проб сахара для микробиологического анализа проводят по ГОСТ 12569-85 и ГОСТ 26668-85.
    Пробы от продуктов отбирают асептическим способом, исключающим микробное загрязнение продукта из окружающей среды.
    При отборе проб жидкого сахара из резервуара, оснащенного краном, кран сначала промывают, вытирают ватой, пропитанной этиловым спиртом, и обжигают в пламени. Затем выпускают до 500 см жидкого сахара (в зависимости от вместимости резервуара и диаметра крана) и только после этого отбирают пробы в посуду, заполняя 3/4 ее объема.
    Широкогорлую посуду закрывают ватными пробками, сверху пробки накладывают чистую бумагу и плотно прижимают ее к горлу посуды. Банки закрывают крышками, предварительно обработанными этиловым спиртом, маркируют этикетками с указанием номера резервуара и крана, даты отбора проб и доставляют на анализ.
    1.2.Пробы отбирают стерильным пробоотборником в стерильную посуду (банки, полиэтиленовые пакеты).
    Посуду, инструменты и материалы, соприкасающиеся с продуктами во время отбора проб, предварительно стерилизуют одним из следующих способов:
    насыщенным паром в стерилизаторе при температуре (121±2) °С 30 мин;
    горячим воздухом в стерилизаторе: с принудительной циркуляцией воздуха при температуре 170-175 °С в течение 60 мин;
    без принудительной циркуляции воздуха при температуре 180-185 °С в течение 15 мин, при температуре 165-170 °С в течение 120 мин.
    Допускается инструменты обрабатывать погружением в этиловый спирт с последующим обжиганием.
    1.3.Отобранные пробы, предназначенные для анализа вне предприятия-изготовителя, пломбируют и опечатывают печатью организации, отвечающей за контролируемую продукцию, и транспортируют в лабораторию. Пробы снабжают актом отбора проб, в котором указывают наименования продукта, предприятия-изготовителя, номер партии, дату отбора проб, цель микробиологического анализа, подписи лиц, отбиравших пробу. Время перевозки до 12 ч с момента отбора проб.
    Отбор, транспортирование в лабораторию и вскрытие проб проводят в условиях, исключающих вторичную микробиальную обсеменость сахара, в соответствии с методами, утвержденными в установленном порядке.
    1.1-1.3.(Измененная редакция, Изм. N 1).
    1.4.Анализ проводят сразу же после доставки сахара в лабораторию.
    1.5.Перед вскрытием полиэтиленового пакета с сахаром его перемешивают 10-кратным переворачиванием или круговым движением.
    Пробы сахара в полиэтиленовых пакетах вскрывают на столе, предварительно обработанном раствором этилового спирта.
    Полиэтиленовые пакеты вскрывают стерильными ножницами, скальпелем или другим инструментом в месте, предварительно обработанном тампоном, смоченным раствором этилового спирта, горлышко банки до и после вскрытия обжигают в пламени спиртовой горелки.
    1.6.После вскрытия пакета или банки с сахаром содержимое перемешивают, стерильными ложкой или шпателем отбирают навеску и переносят ее в предварительно взвешенную стерильную посуду.
    Навески сахара отбирают немедленно после вскрытия упаковки, в непосредственной близости от огня.
    1.5, 1.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    2.АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
    2.1.Для проведения анализа используют следующие аппаратуру, материалы и реактивы:
    микроскоп;
    термостат;
    шкаф сушильный с терморегулятором, обеспечивающим нагрев до 190 °С;
    баню водяную;
    весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-2001;
    рефрактометр;
    рН-метр;
    колбы 2-100-2 по ГОСТ 1770-74 и колбы Кн-2-250-34 ТС и Кн-2-1000-42 ТС по ГОСТ 25336-82;
    палочки стеклянные;
    пипетки вместимостью 1, 2 или 5 см;
    пробирки П1-16-150 ХС по ГОСТ 25336-82;
    стекла покровные по ГОСТ 6672-75;
    стекла предметные по ГОСТ 9284-75;
    термометры стеклянные ртутные от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90 и нормативным документам;
    цилиндры 1(3)-100 по ГОСТ 1770-74;
    чашки ЦБН-2 (Петри) по ГОСТ 25336-82;
    бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026-76;
    вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556-81;
    марлю медицинскую по ГОСТ 9412-93;
    лупу складную карманную по ГОСТ 25706-83;
    ножи и скальпели медицинские по ГОСТ 21240-89;
    пинцеты по ГОСТ 21241-89;
    спиртовку по ГОСТ 25336-82 или газовую горелку;
    мясо-пептонный бульон (МПБ);
    агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;
    воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
    спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
    спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87;
    сусло солодовое неохмеленное;
    кислоту лимонную по ГОСТ 908-79, раствор с массовой долей 20%; готовят следующим образом: 20 г лимонной кислоты переносят в мерную колбу, доводят объем водой до 100 см, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин;
    пробоотборник или щуп из нержавеющей стали;
    чашка нейзильберовая вместимостью 150 см.
    _____________
    * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
    Допускается применение другой аппаратуры, лабораторной посуды с метрологическими и техническими характеристиками не ниже установленных в настоящем стандарте.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
    3.1.Подготовка посуды и материалов
    3.1.1.Посуду, предназначенную для микробиологического анализа, моют, а новую - дополнительно кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты массовой долей 1-2%) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой и стерилизуют.
    Посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 170 °С в течение 2 ч или в стерилизаторе при температуре (121±2) °С в течение 30 мин с последующим подсушиванием.
    Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в стерилизаторе, завернутыми в бумагу.
    Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах.
    3.1, 3.1.1. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.2.Приготовление питательных сред
    3.2.1.Приготовление мясо-пептонного агара
    К 1000 см мясо-пептонного бульона прибавляют 20 г агара, нагревают на водяной бане до растворения, фильтруют через вату, разливают в колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
    3.2.2.Приготовление солодового сусла-агара
    1000 см неохмеленного солодового сусла, разбавленного питьевой водой до массовой доли сухих веществ 8-10%, фильтруют через вату, прибавляют 20 г агара, нагревают на водяной бане до расплавления агара, затем разливают в стерильные колбочки и стерилизуют 15 мин при температуре (115±1)°С.
    Среду охлаждают до (45-55) °С и устанавливают рН 3,6±0,1, добавляя 2-3 см раствора лимонной кислоты с массовой долей 20%. Готовую среду хранят в холодильнике при температуре (4±1) °С не более 7 сут. Если по истечении 7 сут среда остается стерильной, то допускается хранение ее в течение 1 мес.
    3.3.Проведение серии десятикратных разведений
    В нейзильберовой чашке, предварительно обработанной этиловым спиртом и обожженной над спиртовкой, взвешивают 10 г сахара, записывая результат взвешивания до второго десятичного знака.
    Навеску переносят в плоскодонную колбу с 90 см стерильной воды, взбалтывают до полного растворения и получают первое (исходное) разведение.
    Второе разведение готовят из одной части первого разведения и девяти частей стерильной воды путем смешивания в стерильной колбе или пробирке.
    Разведения готовят до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество микроорганизмов в 1 г сахара.
    При приготовлении разведений растворы перемешивают стерильной пипеткой путем десятикратного насасывания и выдувания из нее содержимого.
    Интервал между приготовлением навесок или их разбавлений и высевом в питательные среды не должен превышать 30 мин.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    4.ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
    4.1.Метод определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
    4.1.1.Из разведений, приготовленных по п.3.3, стерильной пипеткой отбирают по 1 или 2 см исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки.
    В каждую чашку Петри не позднее чем через 15 мин добавляют 15-20 см питательной среды (мясо-пептонного агара). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на (72±3) ч при температуре (30±1) °С.
    4.2.Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов
    Из разведений, приготовленных по п.3.3, стерильной пипеткой отбирают по 1 или 2 см исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки. Пробу заливают 15-20 см питательной среды (солодовое сусло-агар). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на 120 ч при температуре 24-30 °С.
    4.3.Бактерии группы кишечных палочек и патогенных микроорганизмов определяют по методам, утвержденным органами государственного санитарно-эпидемиологического надзора.
    4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    5.ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
    5.1.После термостатирования через 24 ч для мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов и через 72 ч для дрожжей и плесневых грибов проводят предварительный подсчет колоний.
    5.2.Окончательный подсчет колоний проводят через (72±3) ч для мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и через 120 ч для дрожжей и плесневых грибов.
    При окончательном подсчете дрожжевых колоний допускается их микроскопировать.
    Если колоний немного, количество определяют визуально; если много, то подсчет ведут на 1/4 или 1/8 площади чашки при помощи лупы, делая затем пересчет на всю чашку и на количество засеянного сахара.
    Колонии микроорганизмов подсчитывают в каждом из параллельных посевов одного разведения. По результатам подсчета вычисляют среднеарифметическое значение количества колоний во всех посевах одного разведения.
    Если имеются колонии, выросшие не из одного, а из следующих друг за другом разведений, то подсчитывают количество микроорганизмов в сахаре по результатам подсчета колоний в каждом из этих разведений раздельно и вычисляют среднеарифметическое значение.
    Количество микроорганизмов в 1 г сахара () вычисляют по формуле
    ,
    где - среднеарифметическое значение количества микроорганизмов в одном разведении;
    - степень разведения продукта;
    - объем посевного материала, внесенного в чашку, см.
    Полученные результаты округляют:
    до числа, кратного 5, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов менее 100 (например, 71 до 75; 83 до 85);
    до числа, кратного 20, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5 (например, 115 до 120; 125 до 140);
    до числа, кратного 10, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5 (например, 116 до 110; 111 до 110; 121 до 120).
    Результат вычислений выражают числом - от 1,0 до 9,9, умноженным на 10,
    где - соответствующая степень разведения продукта.
    Пример: 75-0,75х10; 1110-1,11х10.
    Текст документа сверен по:
    официальное издание
    Сахар. Технические условия. Правила приемки.
    Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
    М.: ИПК Издательство стандартов, 2002