СССР
Государственный стандарт от 01 июля 1981 года № ГОСТ 24230-80

ГОСТ 24230-80 Корма растительные. Метод определения переваримости in vitro (с Изменением N 1)

Принят
Государственным комитетом СССР по стандартам
06 июня 1980 года
    ГОСТ 24230-80*
    Группа С19
    МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
    КОРМА РАСТИТЕЛЬНЫЕ
    Метод определения переваримости in vitro
    Vegetable feeds. Method for determination of digestibility in vitro
    ОКП 92 8000
    Дата введения 1981-07-01
    Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 июня 1980 г. N 2627 дата введения установлена 01.07.81
    Ограничение срока действия снято Постановлением Госстандарта от 06.06.91 N 816
    * ПЕРЕИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в июне 1986 г. (ИУС 9-86).
    Настоящий стандарт распространяется на растительные корма и устанавливает метод определения переваримости сухого вещества кормов in vitro. Метод применяют в агротехнических и селекционных опытах.
    Сущность метода заключается в определении степени переваримости (растворения) сухого вещества с помощью ферментов пепсина и целловиридина.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    1.МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
    1.1.Отбор проб зеленого корма
    1.1.1.На участке травостоя выделяют 8-10 учетных площадок размером 1-2 м. Травостой скашивают на высоте 3-5 см. Полученную со всех учетных площадок зеленую массу послойно расстилают на брезенте или полимерной пленке и тщательно перемешивают, получая таким образом объединенную пробу. Для составления средней пробы, масса которой должна быть 1,5-2,0 кг, траву берут порциями по 150-200 г из 10 различных мест. Пробу помещают в пакет из полимерной пленки, куда вкладывают этикетку с указанием адреса и наименования хозяйства, отделения, бригады, номера поля, участка, вида травостоя, фазы вегетации и года урожая. Отобранную пробу сразу же направляют в лабораторию для подготовки к анализу.
    1.1.2.От зеленой массы, доставленной на фермы для непосредственного скармливания животным или для приготовления силоса, сенажа, искусственно-обезвоженных кормов, точечные пробы берут вручную или пробоотборником не менее чем из 10 мест порциями по 400-500 г; зеленый корм послойно расстилают на брезенте или полимерной пленке и тщательно перемешивают, получая таким образом объединенную пробу. Среднюю пробу составляют, как указано в п.1.1.1.
    1.2.Отбор проб сена - по ГОСТ 4808-87.
    1.3.Отбор проб силоса - по ГОСТ 23638-90.
    1.4.Отбор проб сенажа - по ГОСТ 23637-90.
    1.5.Отбор проб брикетов, гранул и муки из трав - по ГОСТ 13496.0-80.
    2.АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
    2.1.Для проведения испытания применяют:
    мельницу лабораторную марки МГК-2 или других марок, обеспечивающих равномерное, измельчение корма на частицы размером около 1 мм;
    весы лабораторные аналитические;
    весы технические 2-3-го класса точности;
    термостат биологический с температурой нагрева 38-40 °С;
    насос водоструйный лабораторный;
    шкаф сушильный лабораторный;
    центрифугу лабораторную с частотой вращения 2500 мин;
    пипетку автоматическую вместимостью 50 см;
    пробирки центрифужные вместимостью 100 см;
    эксикатор по ГОСТ 25336-82 или аналогичных марок;
    штативы для пробирок;
    пепсин медицинский;
    фермент целлюлазу (целловиридин) марки ГЗх, активностью не менее 75 ед/г;
    кислоту соляную по ГОСТ 3118-77, х.ч.;
    кислоту лимонную, ос.ч.;
    натрий кислый ортофосфорнокислый двузамещенный 12-водный, ос.ч.;
    воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
    3.1.Приготовление реактивов
    3.1.1.Раствор пепсина, 0,2%-ный: 2 г пепсина растворяют в 1 дм 0,1 М соляной кислоты.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.1.2.Раствор лимонной кислоты 0,1 М: 21,008 г лимонной кислоты растворяют в 1 дм дистиллированной воды.
    3.1.3.Раствор кислого ортофосфорнокислого натрия 0,2 М: 35,52 г натрия кислого ортофосфорнокислого растворяют в 1 дм дистиллированной воды.
    3.1.4.Раствор цитрат-фосфатный буферный с рН 4,6: 10,65 см 0,1 М раствора лимонной кислоты смешивают с 9,35 см 0,2 М раствора натрия кислого ортофосфорнокислого.
    3.1.5.Раствор целлюлазы: 5 г целловиридина растворяют в 1 дм цитрат-фосфатного буфера.
    3.1.6.Определение активности целлюлозы
    Для определения активности целлюлазы готовят стандартный раствор: 5 г целловиридина растворяют в 100 см цитрат-фосфатного буфера, получая таким образом в 1 см раствора 50 мг фермента. В 10 предварительно высушенных до постоянной массы пробирок помещают по 200 мг корма известной переваримости, значение которой определено в опытах in vivo (на животных), приливают в каждую из них соответствующее количество стандартного раствора и цитрат-фосфатного буфера, как указано в таблице.
    Номер пробирки Количество стандартного раствора, см Количество цитрат-фосфатного буфера, см Содержание (активность), фермента, мг Переваримость корма, %
    1 1 19 50
    2 2 18 100
    3 3 17 150
    4 4 16 200
    5 5 15 250
    6 6 14 300
    7 7 13 350
    8 8 12 400
    9 9 11 450
    10 10 10 500

    Пробирки закрывают пробками, ставят в биологический термостат и выдерживают там в течение 24 ч при температуре 38-40 °С. После этого надосадочную жидкость отсасывают водоструйным насосом, а пробирки с остатками непереваренного корма высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Переваримость (растворимость) сухого вещества корма в каждой пробирке определяют по формуле, приведенной в п.5.1. На основании полученных данных о переваримости корма строят калибровочную кривую. Оптимальной считается та доза фермента, увеличение которой не приводит к дальнейшему (более 5%) повышению переваримости (растворимости) сухого вещества корма.
    3.1.5, 3.1.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    3.2.Подготовка пробы для анализа
    3.2.1.Сразу после поступления в лабораторию, но не более 4 ч после отбора пробы фиксируют в сушильном шкафу при температуре 80-90 °С в течение 30 мин для прекращения ферментативных процессов в свежескошенных растениях.
    3.2.2.50-100 г корма высушивают в сушильном шкафу при температуре 65 °С до воздушно-сухого состояния и измельчают на лабораторной мельнице до размера частиц 1 мм.
    3.2.3.Массовую долю гигроскопической влаги определяют по ГОСТ 23637-90.
    4.ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
    4.1.Навески измельченного воздушно-сухого корма массой около 500 мг, взвешенные с погрешностью не более 0,001 г, помещают в пробирки, предварительно высушенные до постоянной массы, заливают 50 см 0,1 н. раствора солянокислого пепсина, закрывают пробками и выдерживают в биологическом термостате 24 ч при 38-40 °С. После этого надосадочную жидкость удаляют водоструйным насосом и фильтровальной трубкой, промывают дистиллированной водой, центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 2500 мин и снова удаляют надосадочную жидкость.
    Остаток в пробирках заливают 50 см раствора целлюлазы и снова помещают в биологический термостат на 48 ч при 38-40 °С. Периодически (3-4 раза в день) содержимое пробирок встряхивают так, чтобы частицы корма не оставались на стенках пробирок. По окончании второго этапа переваривания надосадочную жидкость удаляют, промывают непереваренный остаток дистиллированной водой, центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 2500 мин и снова отсасывают надосадочную жидкость водоструйным насосом с фильтровальной трубкой. Пробирки с непереваренными остатками помещают в сушильный шкаф, высушивают при 100-105 °С до постоянной массы и после охлаждения в эксикаторе взвешивают с погрешностью не более 0,001 г.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    4.2.В каждый опыт, кроме испытуемых образцов, включают не менее двух контрольных образцов корма (злакового бобово-злакового и так далее, в зависимости от изучаемого вида растений) с известной (высокой, низкой, промежуточной) переваримостью сухого вещества, определенной методом in vivo.
    Данные, полученные in vivo, позволяют рассчитать коэффициенты поправки или уравнение регрессии для перевода данных in vitro в in vivo и сравнивать результаты, полученные в разное время и в разных лабораториях.
    (Введен дополнительно, Изм. N 1).
    5.ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
    5.1.Переваримость сухого вещества корма in vitro () в процентах вычисляют по формуле
    ,
    где - масса навески корма, мг;
    - масса высушенного непереваренного остатка корма, мг;
    - массовая доля гигроскопической влаги в корме, %.
    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
    Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 3%.
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    Текст документа сверен по:
    официальное издание
    Комбикорма. Часть 7.
    Корма растительные.
    Методы анализа:
    Сборник ГОСТов. -
    М.: ИПК Издательство стандартов, 2002