-32300: transport error - HTTP status code was not 200
СССР
Государственный стандарт от 01 января 1990 года № ГОСТ 9.803-88
ГОСТ 9.803-88 ЕСЗКС. Фунгициды. Метод определения эффективности
- Принят
- Государственным комитетом СССР по стандартам
28 ноября 1988 года
ГОСТ 9.803-88
Группа Т97
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
Единая система защиты от коррозии и старения
ФУНГИЦИДЫ
Метод определения эффективности
Unified system of corrosion and ageing protection.
Fungicides. Efficiency determining method
ОКСТУ 0009
Дата введения 1990-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1.РАЗРАБОТЧИКИ
Х.Н.Фидлер, канд. техн. наук; Ю.В.Моисеев, д-р хим. наук; Э.Г.Африкян, д-р биол. наук; Б.А.Чепенко, канд. техн. наук; З.С.Боголюбова; А.А.Малама, канд. биол. наук (руководители темы); О.А.Хачатурова; В.А.Габечава; Р.Э.Хведелидзе; С.А.Семенов, канд. техн. наук; А.А.Рыжков, канд. хим. наук; К.З.Гумаргалиева, канд. хим. наук; Л.С.Хачатрян, канд. биол. наук; С.Н.Миронова, канд. биол. наук; Т.В.Филимонова
2.УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 28.11.88 N 3857
3.Срок проверки - 1996 г., периодичность проверки - 5 лет
4.ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5.ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
| Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта, приложения |
| ГОСТ 9.048-89 | 1.1; 2.1; Разд.3; 4.2; 4.3; 4.4; 4.5; 4.9; 4.10, разд.7 |
| ГОСТ 9.049-91 | 2.1 |
| ГОСТ 9.050-75 | 2.1 |
| ГОСТ 9.707-81 | 1.5 |
| ГОСТ 9.802-84 | 2.1 |
| ГОСТ 19.402-78 | Приложение 3 |
| ГОСТ 1770-74 | Приложение 1 |
| ГОСТ 3956-76 | Разд.3 |
| ГОСТ 6709-72 | Приложение 1 |
| ГОСТ 9147-80 | Разд.3 |
| ГОСТ 14888-78 | Приложение 1 |
| ГОСТ 24104-88 | Разд.3 |
| ГОСТ 25336-82 | Разд.3, приложение 1 |
| ГОСТ 25706-83 | Разд.3 |
6.ПЕРЕИЗДАНИЕ
Настоящий стандарт распространяется на вещества, обладающие фунгицидной и (или) фунгистатической активностью (далее - фунгициды), предназначенные для защиты материалов и изделий от повреждения плесневыми грибами (далее - грибами) и устанавливает метод испытаний эффективности фунгицидов.
Стандарт не распространяется на газообразные фунгициды, а также водонерастворимые фунгициды, разлагающиеся при температуре менее 90 °С.
Сущность метода заключается в культивировании грибов на питательной среде, содержащей фунгициды, и оценке их эффективности по кинетическим параметрам развития грибов.
1.ОТБОР ОБРАЗЦОВ
1.1.В качестве образцов для испытаний водорастворимых фунгицидов применяют их растворы в среде Чапека-Докса. Среду Чапека-Докса готовят по ГОСТ 9.048. Концентрации водорастворимых фунгицидов выбирают из ряда: 2х10; 4х10; 8х10; 2х10; 4х10; 8х10; 2х10; 8х10; 2х10; 4х10; 2х10; 4х10; 8х10 м оль/дм.
1.2.В качестве образцов для испытаний водонерастворимых фунгицидов применяют пленки этих веществ, осажденных на синтезированных гидрогелевых подложках.
Концентрация водонерастворимых фунгицидов на поверхности подложки должна составлять: 1х10; 2х10; 5х10; 8х10; 1х10; 2х10; 5х10; 8х10; 1х10; 2х10; 5х10 моль/см.
Концентрация водонерастворимых фунгицидов в растворе органических растворителей, применяемых для осаждения на поверхность подложки, соответственно выбирают из ряда: 1,57х10; 3,14х10; 7,85х10; 10,56х10; 1,57х10; 3,14х10; 7,85х10; 12,50х10; 1,57х10; 3,14х10; 7,85х10 моль/дм.
Метод изготовления гидрогелевой подложки с осажденной на ней пленкой водонерастворимого фунгицида привед
ен в приложении 1.
1.3.Количество исследуемых концентраций каждого фунгицида должно быть не менее 10.
1.4.Контрольными образцами для водорастворимых фунгицидов является среда Чапека-Докса, не содержащая фунгицидов, а для водонерастворимых - гидрогелевая подложка без пленки фунгицидов.
1.5.Количество проб (N) для каждого из отборов каждой из концентраций фунгицидов и для контрольных образцов рассчитывают по ГОСТ 9.707, приложение 3. Если относительная ошибка и вероятность попадания среднего арифметического значения в доверительный интервал не заданы, количество проб на один отбор должно быть не менее семи.
2.ВИДЫ ГРИБОВ
2.1.Виды грибов для испытаний фунгицидов, применяемых для защиты:
полимерных материалов - по ГОСТ 9.049;
лакокрасочных покрытий - по ГОСТ 9.050;
тканей - по ГОСТ 9.802;
других типов материалов и изделий - по ГОСТ 9.048.
3.АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Аппаратура, материалы и реактивы по ГОСТ 9.048.
Подложки гидрогелевые (см. приложение 1).
Колба с тубусом исполнения 1 номинальной вместимостью 1000 смпо ГОСТ 25336.
Фильтр обеззоленный - синяя лента диаметром 5,5 см.
Воронка Бюхнера N 1 по ГОСТ 9147.
Насос водоструйный по ГОСТ 25336.
Эксикатор исполнения 1 диаметром корпуса 250 мм по ГОСТ 25336.
Лупа четырехкратная по ГОСТ 25706.
Пипетка вместимостью 2 см.
Пипетка вместимостью 5 см.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Чашка исполнения 2 типа ЧБН по ГОСТ 25336.
Стаканчик типа СВ с взаимозаменяемым конусом 34/12 по ГОСТ 25336.
Силикагель технический прокаленный по ГОСТ 3956.
Колба коническая по ГОСТ 25336 вместимостью 100 см из стекла группы ТС.
4.ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЯМ
4.1.Для проведения испытаний составляют программу, в которой указывают:
объект испытаний (наименование, марка фунгицида и НТД), завод-изготовитель;
растворимость в воде и других растворителях, режим испытаний;
перечень используемых при испытаниях НТД;
метрологическое обеспечение испытаний;
обозначение настоящего стандарта.
4.2.Посуду, применяемую при испытании, готовят по ГОСТ 9.048.
4.3.Питательные среды для выращивания и хранения культур плесневых грибов готовят по ГОСТ 9.048.
4.4.Пересев, выращивание, хранение культур плесневых грибов и оценка их жизнеспособности - по ГОСТ 9.048.
4.5.Суспензию спор каждого вида грибов в воде готовят по ГОСТ 9.048, при этом концентрация их должна быть 1-2 млн/см.
4.6.Готовят растворы водорастворимых фунгицидов в среде Чапека-Докса по п.1.1.
4.7.Готовят растворы водонерастворимых фунгицидов в соответствующих органических растворителях квалификации ч. и ч.д.а. по п.1.2. Подготовленные растворы разливают в чашки ЧБН по (5,00±0,05) сми выпаривают органический растворитель, помещая ЧБН в термостат, полки которого устанавливают горизонтально по уровню. Термостат устанавливают в вытяжном шкафу. Устанавливают температуру в термостате на (5±2) °С ниже температуры кипения соответствующего растворителя и выпаривают до постоянной массы.
4.8.В чашках ЧБН синтезируют гидрогелевые подложки (см. приложение 1).
4.9.Гидрогелевые подложки стерилизуют по ГОСТ 9.048 в чашках ЧБН, устанавливая их в боксы под ртутными или ртутно-кварцевыми лампами на расстоянии (50±10) см и выдерживают (240±6) мин.
4.10.Для испытаний водонерастворимых фунгицидов подготавливают чашки ЧБН, дно которых полностью покрывают отрезками стеклянных трубок и стерилизуют по ГОСТ 9.048.
5.ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЙ
5.1.Проведение испытаний водорастворимых фунгицидов
5.1.1.В конические колбы вместимостью 100 см разливают по 40 смрастворов, приготовленных по п.4.6, и контрольную пробу (см. п.1.4). Количество параллельных проб в соответствии с п.1.5.
5.1.2.Из приготовленных суспензий спор грибов (п.4.5) берут по 2 смкаждого из видов и смешивают между собой.
5.1.3.В конические колбы, подготовленные по п.5.1.1, наливают по 1 см суспензии спор грибов, подготовленной по п.5.1.2.
5.1.4.Конические колбы, подготовленные по пп.5.1.1-5.1.3, закрывают ватными пробками в стерильных условиях и помещают в термостат при температуре (29±2) °С.
5.1.5.Промежуток времени, в течение которого не наблюдается развитие грибов (далее - лаг-фаза ), при всех концентрациях водорастворимого фунгицида и в контрольных пробах устанавливают по появлению хотя бы на одной пробе биомассы грибов, видимой невооруженным глазом. Периодичность осмотров для выявления лаг-фазы 24 ч.
Если разность минимального и максимального значений лаг-фазы в пробах в любом из отборов превышает 75% ее минимального значения, испытания повторяют на новой серии образцов.
5.1.6.Для количественного определения биомассы при всех концентрациях отборы проводят один раз в 3 сут, а для контрольных проб - один раз в сутки. Общее количество отборов должно быть не менее семи. Продолжительность испытаний - не более 42 сут.
5.1.7.Содержимое колбы сливают на предварительно высушенный до постоянной массы при температуре (105±2) °С и взвешенный обеззоленный фильтр, установленный в приспособлении для вакуумного фильтрования, состоящем из воронки Бюхнера, колбы с тубусом и водоструйного насоса. Биомассу отмывают дистиллированной водой в количестве 100 см.
5.1.8.После вакуумного фильтрования фильтр с биомассой помещают в предварительно высушенный при температуре (105±2) °С и взвешенный до постоянной массы стаканчик СВ и сушат в термостате с открытой крышкой при температуре (105±2) °С с периодичностью взвешивания 2 ч. Стаканчик с фильтром после каждого из периодов сушки помещают в эксикатор с силикагелем на 1 ч до полного остывания, а затем взвешивают. Сушку прекращают, когда масса стаканчика с фильтром при последующем взвешивании отличается от его массы в предыдущем не более чем на ±0,4 мг.
5.1.9.Если в контрольном опыте по истечении 5 сут не наблюдается развития грибов, споры, использованные для заражения, считают нежизнеспособными.
5.1.10.Вычисляют биомассу каждой пробы каждого отбора каждой из концентраций фунгицида.
5.1.11.Определяют среднее арифметическое значение биомассы () в каждом из отборов.
5.1.12.Испытания при каждой из концентраций фунгицидов прекращают, если количество биомассы в последующем отборе не увеличивается по сравнению с предыдущим.
5.1.13.Данные испытаний заносят в протокол, форма которого приведена в приложении 2.
5.2.Проведение испытаний водонерастворимых фунгицидов
5.2.1.Испытания проводят на гидрогелевых подложках с осажденным на них водонерастворимым фунгицидом различных поверхностных концентраций (пп.4.7-4.9).
5.2.2.В чашки ЧБН, подготовленные по п.4.10, наливают питательную среду Чапека-Докса, в них укладывают гидрогелевые подложки (п.5.2.1) так, чтобы поверхность подложки, свободная от фунгицида, контактировала с питательной средой, а на поверхность, содержащую фунгицид, равномерно наносят 1 см суспензии спор грибов, полученной по п.5.1.2.
5.2.3.Чашки ЧБН накрывают крышками, помещают в камеру или эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор закрывают крышкой. Испытания проводят при температуре (29±2) °С и относительной влажности более 90%. В камере (эксикаторе) не допускают конденсации влаги, принудительной вентиляции и воздействия прямого естественного или искусственного освещения.
Не реже одного раза в 7 сут эксикаторы или камеры открывают для притока воздуха.
5.2.4.Лаг-фазу при всех концентрациях водонерастворимого фунгицида и в контрольных пробах определяют по времени, в течение которого хотя бы на одной из проб появляется биомасса грибов, видимая при четырехкратном увеличении. Периодичность осмотров - 24 ч.
5.2.5.Для количественного определения биомассы периодичность отборов и их количество - по п.5.1.6. При каждом отборе подложку вынимают из чашки ЧБН, биомассу полностью снимают с поверхности подложки шпателем или лопаткой на предварительно высушенный до постоянной массы при температуре (105±2) °С беззольный фильтр с синей полосой, установленный в приспособлении для вакуумного фильтрования. Проводят вакуумное фильтрование. Биомассу отмывают дистиллированной водой в количестве 100 см.
5.2.6.В дальнейшем испытания проводят в соответствии с пп.5.1.8- 5.1.13.
6.ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
6.1.Эффективность фунгицидов определяют по зависимости кинетических параметров уравнения, описывающего рост биомассы, от концентрации этих веществ.
6.2.Кинетические параметры (коэффициенты и ) уравнения, связывающего текущее среднее арифметическое значение удельной биомассы () и среднее максимальное () значение удельной биомассы при различных концентрациях фунгицида вычисляют по формуле
, (1)
где - средняя максимальная удельная биомасса, достигнутая при развитии грибов в присутствии фунгицида каждой из концентраций и в контрольной пробе, мг/см или мг/дм;
- минимальная, экспериментально полученная лаг-фаза для данной концентрации фунгицида и в контрольной пробе, ч;
- продолжительность выдержки, после которой произведен отбор, ч;
- коэффициент, характеризующий способность споры образовывать биомассу при данной концентрации фунгицида и в контрольной пробе;
- коэффициент, характеризующий удельную скорость развития микроорганизмов на данной питательной среде (при -й концентрации фунгицида), ч.
Преобразуем уравнение (1)
(2)
и методом наименьших квадратов вычисляют коэффициенты и по формулам:
; (3)
, (4)
где - порядковый номер отбора (=1, 2, ..., ).
6.3.Определенные по п.6.2 коэффициенты и подставляют в формулу (1) и находят расчетные значения .
6.4.Рассчитывают средние квадратические отклонения () экспериментальных значений от расчетных по формуле
.
Если в эксперименте имеются значения , которые не попадают в интервал (), их исключают из данных эксперимента и коэффициенты и вновь определяют по п.6.2 для оставшихся точек до тех пор, пока все оставшиеся экспериментальные точки будут попадать в интервал . Количество их должно быть не менее пяти
.
6.5.Оставшиеся для расчета экспериментальные данные биомассы , а также и полученные по п.6.2 коэффициенты и подставляют в формулу (2) и получают продолжительность лаг-фазы () для каждой из концентраций фунгицида и в контрольной пробе ().
6.6.Определяют константу , характеризующую зависимость лаг-фазы от концентрации фунгицида, по формуле
, (5)
где - концентрация фунгицида от =0 до ;
- минимальная продолжительность лаг-фазы при каждой концентрации фунгицида, ч;
- минимальная продолжительность лаг-фазы в контрольной пробе, ч.
Преобразуют уравнение (5)
(6)
и методом наименьших квадратов рассчитывают константу по формуле
, (7)
где - порядковый номер концентрации (= 1, 2,...,
)
.
6.7.Используя полученную по п.6.6 константу , рассчитывают по формуле (6).
6.8.Рассчитывают среднее квадратическое отклонение () полученных по п.6.5 значений от их расчетных значений.
Если есть вычисленные по п.6.5 значения , не попадающие в интервал (), их исключают и константу рассчитывают по оставшимся значениям до тех пор, пока все оставшиеся значения будут попадать в интервал . Количество их должно быть не менее пят
и.
6.9.Если экспериментальные данные не удовлетворяют требованиям п.6.8, испытания повторяют.
6.10.По полученным (пп.6.2-6.4) коэффициентам для различных концентраций фунгицида находят константу , характеризующую зависимость удельной скорости развития грибов от концентрации фунгицида по формуле
, (8)
где - коэффициент уравнения (1) для концентрации фунгицида ();
- коэффициент уравнения (1) в контрольной пробе;
- концентрация фунгицида, включая нулевое значение, моль/см или моль/дм;
- константа, численно равная концентрации фунгицида, при которой коэффициент уменьшается в 2 раза по сравнению с развитием гриба на среде, не содержащей фунгицида.
Преобразуют уравнение (8) в линейное
(9)
и методом наименьших квадратов вычисляют значение параметра по формуле
, (10)
где =1, 2,..., - порядковый номер концентрации.
6.11.Чем ниже значение и выше значение , тем более эффективным является фунгицид.
6.12.Результаты испытаний могут быть обработаны на ЭВМ в соответствии с программой, приведенной в приложении 3.
6.13.Для предварительной оценки эффективности фунгицида определяют лаг-фазу, используя вместо семи отборов, предусмотренных в пп.5.1.6 и 5.2.5, только три отбора, и рассчитывают с использованием уравнения (1) и п.6.6.
7.ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
Требования безопасности - по ГОСТ 9.048.