Международный договор
Государственный стандарт от 01 января 1995 года № ГОСТ 13496.19-93

ГОСТ 13496.19-93 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания нитратов и нитритов

Принят
Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации
01 января 1995 года
Разработан
Государственным комитетом Российской Федерации по стандартизации и метрологии
01 января 1995 года
    ГОСТ 13496.19-93
    Группа С19
    МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
    КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
    Методы определения содержания нитратов и нитритов
    Fodder, mixed fodder and animal feed raw stuff.
    Methods of nitrate and nitrite determination
    ОКСТУ 9209
    Дата введения 1995-01-01
    Предисловие
    1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России
    ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации
    2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.
    За принятие проголосовали:
    Наименование государства Наименование национального органа по стандартизации
    Киргизская Республика Киргизстандарт
    Республика Молдова Молдовастандарт
    Российская Федерация Госстандарт России
    Республика Таджикистан Таджикгосстандарт
    Туркменистан Главная государственная инспекция Туркменистана
    Украина Госстандарт Украины

    3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 N 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.19-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95
    4 ВЗАМЕН ГОСТ 13496.19-86
    5 ПЕРЕИЗДАНИЕ ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
    Обозначение НТД, на который дана ссылка Номер раздела, пункта
    ГОСТ 334-73 3.1
    ГОСТ 1770-74 4.1
    ГОСТ 3118-77 4.1
    ГОСТ 3760-79 4.1
    ГОСТ 3773-72 4.1
    ГОСТ 4108-72 4.1
    ГОСТ 4165-78 4.1
    ГОСТ 4197-74 4.1
    ГОСТ 4204-77 3.1
    ГОСТ 4217-77 3.1; 4.1
    ГОСТ 4234-77 3.1; 1
    ГОСТ 4328-77 4.1
    ГОСТ 4329-77 3.1
    ГОСТ 4330-76 4.1
    ГОСТ 4453-74 4.1
    ГОСТ 4456-75 4.1
    ГОСТ 6552-80 4.1
    ГОСТ 6709-72 3.1; 4.1
    ГОСТ 10652-73 4.1
    ГОСТ 10929-76 3.1
    ГОСТ 12026-76 4.1
    ГОСТ 13496.0-80 1
    ГОСТ 13979.0-86 1
    ГОСТ 20490-75 3.1
    ГОСТ 24104-88 2.1; 3.1; 4.1
    ГОСТ 25336-82 4.1
    ГОСТ 27262-87 1

    Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает ионометрический метод определения содержания нитратов и фотометрические методы определения содержания нитратов и нитритов.
    1 Отбор проб
    Отбор проб - по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 27262.
    2 Ионометрический метод определения содержания нитратов
    Сущность метода заключается в извлечении нитратов раствором алюмокалиевых квасцов и последующем измерении концентрации нитратов с помощью ионоселективного электрода.
    2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
    Измельчитель проб растений марки ИПР-2 или соломорезка марки ИСР-1 или аналогичных марок.
    Мельница лабораторная марки МРП-2 или аналогичных марок.
    Ножницы.
    Сито с отверстиями диаметром 1 мм.
    Сушилка проб кормов СК-1 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры не более 5 °С (или сушилка и шкаф аналогичных марок).
    Мезгообразователь МЛ-1 или аналогичных марок.
    Соковыжималка.
    Терка пластмассовая.
    Мясорубка бытовая или электрическая, или механическая с диаметром отверстий 3 мм.
    Весы лабораторные по ГОСТ 24104* 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и 3-го класса точности с пределом взвешивания 500 г или другие весы того же класса точности.

    ________________
    * С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).


    Иономер, рН-метр, милливольтметр, нитратомер или приборы с микропроцессорами, или другие аналогичные приборы с погрешностью измерения ЭДС не более 5 мВ.
    Электрод ионоселективный нитратный с линейной функцией в диапазоне С (NO)=(рСNO=1-4) с наклоном (56±3) мВ на единицу рCNО.
    Электрод вспомогательный хлорсеребряный или насыщенный каломельный с нестабильностью потенциала за 8 ч не более 0,5 мВ и скоростью истечения раствора через электролитический ключ 0,3-3,5 см в сутки при температуре (25±5) °С. Электрическое сопротивление электрода не более Ом.
    Баня водяная.
    Мешалка лабораторная электромеханическая или магнитная.
    Встряхиватель или ротатор.
    Гомогенизатор, измельчители различного типа.
    Колбы мерные вместимостью 50, 100, 1000 см по ГОСТ 1770.
    Стаканы химические вместимостью 50, 500 и 1000 см по ГОСТ 25336.
    Дозатор вместимостью 50 см с погрешностью дозирования не более 0,5 см или мерный цилиндр вместимостью 50 см по ГОСТ 1770.
    Пипетки градуированные 1(2,4,5,6)-2-(2,5,10).
    Квасцы алюмокалиевые по ГОСТ 4329, ч. д. а.
    Калий хлористый по ГОСТ 4234, х. ч.
    Калий азотнокислый по ГОСТ 4217, х. ч.
    Кислота серная по ГОСТ 4204, ч. д. а.
    Калий марганцовокислый по ГОСТ 20490, х. ч.
    Перекись водорода водный раствор с массовой концентрацией 33% по ГОСТ 10929, х. ч., ч. д. а.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
    Бумага масштабная координатная Д2 по ГОСТ 334.
    Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду и другие средства измерений, имеющие такие же или лучшие метрологические характеристики.
    2.2 Подготовка к испытанию
    2.2.1 Подготовка проб
    2.2.1.1 Среднюю пробу сена, силоса, сенажа, зеленых кормов и т.п. измельчают на измельчителе проб растений, соломорезке или ножницами на отрезки длиной 1-3 см. Методом квартования выделяют часть пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 50 г. Высушивание проб проводят до воздушно-сухого состояния при температуре 60-65 °С. Воздушно-сухую пробу размалывают на лабораторной мельнице и просеивают через сито. Остаток на сите измельчают ножницами и добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.
    При анализе проб зеленых кормов, силоса и сенажа в натуральном виде выделенную часть измельченной средней пробы используют непосредственно для анализа или после размалывания на мельнице в течение 2-4 мин.
    2.2.1.2 Из средней пробы комбикормов или комбикормового сырья методом квартования выделяют около 50 г материала, размалывают без предварительного подсушивания и просеивают через сито. Остаток на сите с массовой долей не более 4% измельчают ножницами, добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.
    2.2.1.3 Пробы корнеклубнеплодов анализируют в свежем виде. Корнеклубнеплоды предварительно моют водой, вытирают чистой тканью или фильтровальной бумагой и выделяют часть средней пробы. Для этого корнеплод разрезают вдоль оси крестообразно на четыре равные части и отбирают одну четвертую часть. Выделенную часть средней пробы измельчают, используя терку, мезгообразователь или мясорубку и тщательно перемешивают.
    2.2.1.4 Пробы жидких кормов анализируют без предварительной подготовки.
    2.2.1.5 При анализе проб кормов с высоким содержанием влаги и легкоотдающих сок возможно использование сока для анализа. В этом случае отобранную и измельченную часть средней пробы пропускают через соковыжималку. Полученный сок собирают в одну емкость и перемешивают. Если результат, полученный при анализе сока, превышает ПДК, то анализ повторяют с использованием навески.
    2.2.2 Приготовление раствора алюмокалиевых квасцов с массовой долей 1% (экстрагирующий раствор)
    10 г алюмокалиевых квасцов взвешивают с погрешностью не более 0,1 г, переносят в химический стакан вместимостью 1000 см и растворяют в 990 см дистиллированной воды.
    Раствор хранят в склянке с притертой пробкой не более 1 года. При появлении мути или осадка раствор заменяют свежеприготовленным.
    2.2.3 Приготовление экстрагирующего раствора для определения нитратов в культурах семейства капустных
    10 г алюмокалиевых квасцов переносят в химический стакан вместимостью 1000 см, растворяют в 990 см дистиллированной воды. Затем (1,0±0,001) г марганцово-кислого калия помещают в ту же колбу и добавляют 0,6 см концентрированной серной кислоты. Полученную смесь взбалтывают до растворения всех градиентов, доводят раствор до метки дистиллированной водой и хранят в склянке с притертой пробкой.
    2.2.4 Приготовление основного раствора азотнокислого калия концентрации (KNО)=0,1 моль/дм ()
    10,11 г азотнокислого калия, высушенного при температуре 100-105 °С до постоянной массы, взвешивают с погрешностью не более 0,001 г, растворяют в экстрагирующем растворе в мерной колбе вместимостью 1000 см и доводят объем раствора до метки тем же раствором.
    Раствор хранят в склянке с притертой пробкой не более 1 года. При появлении мути или осадка раствор заменяют свежеприготовленным.
    2.2.5 Приготовление растворов сравнения
    Растворы сравнения готовят из основного раствора азотнокислого калия (п.2.2.4) в день проведения анализа, используя для разбавления раствор алюмокалиевых квасцов.
    2.2.5.1 Раствор сравнения концентрации ()=0,01 моль/дм готовят следующим образом: основной раствор азотно-кислого калия разбавляют в 10 раз раствором алюмокалиевых квасцов с массовой долей 1%. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см отбирают пипеткой 10 см основного раствора концентрации (KNO)=0,1 моль/дм и доводят до метки раствором алюмокалиевых квасцов и перемешива ют.
    2.2.5.2 Раствор сравнения концентрации () = 0,001 моль/дм () готовят по п.2.2.5.1 и разбавляют в 10 раз раствором алюмокалиевых квасцов.
    2.2.5.3 Раствор сравнения концентрации ()=0,0001 моль/дм готовят по п.2.2.5.2 и разбавляют в 10 раз раствором алюмокалиевых квасцов.
    Полученные растворы сравнения используют для градуировки иономеров, проверки электродов и построения градуировочного графика. Активность иона нитрата в растворе сравнения указанной концентрации азотнокислого калия соответственно равна 2, 3, 4.
    2.2.6 Подготовка электродов к работе
    2.2.6.1 Подготовка нитратного ионоселективного электрода и вспомогательного электрода к работе
    Мембранный ионоселективный нитратный электрод и вспомогательный электрод сравнения готовят к работе в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к ним.
    В промежутках между исследованиями мембранный нитратный электрод погружают в раствор концентрации ()=0,0001 моль/дм, если перерывы в работе составляют сутки и более, его хранят в растворе азотно-кислого калия концентрации ()=0,001 моль/дм. При длительных перерывах между исследованиями (более 5 дней) электрод хранят на воздухе, а перед началом работы вымачивают 1-2 ч в растворе азотно-кислого калия концентрации ()=0,1 моль/дм. В обоих случаях перед началом измерений электрод промывают водой не менее трех раз.
    Вспомогательный электрод сравнения в перерывах между исследованиями погружают в стакан с дистиллированной во
    дой.
    2.2.6.2 Проверка правильности работы электродной пары
    Проверку правильности работы электродной пары следует начать с подбора нитратного ионоселективного электрода, который обеспечивает линейность характеристики электрода в диапазоне =1-4, с наклоном (56±3) мВ. Проверку правильности работы электродной пары (нитратного ионоселектиьного электрода в паре со вспомогательным электродом) можно проводить с помощью стандартного образца корма, аттестованного на содержание нитратов. Допустимое отклонение полученного результата от аттестованного значения рассчитывают по 3.4.4. В случае превышения допустимого отклонения от аттестованного значения, необходимо подбирать другие пары электродов.
    2.3 Проведение испытания
    2.3.1 Приготовление экстрактов
    2.3.1.1 Приготовление экстрактов сухих проб
    Масса анализируемой навески зависит от предполагаемого содержания нитратов. Навеска для проб кормов со сравнительно высоким содержанием нитратов (кормовые травы, силос, сенаж, жмыхи, шроты и премиксы) составляет 1 г, которую взвешивают с погрешностью не более 0,01 г; навеска для проб кормов со средним и низким содержанием нитратов (силос, сенаж, сено злаковых, комбикорма) - 5 г, которую взвешивают с погрешностью не более 0,01 г.
    Навески помещают в технологические емкости вместимостью 100 или 200 см, приливают 50 см раствора алюмокалиевых квасцов, приготовленных по 2.2.2, закрывают пробкой или крышкой и перемешивают 3 мин с помощью электромеханической мешалки или ротатора. В полученной суспензии измеряют концентрацию нитрат-ионов.
    Для жмыхов и шротов возможно взятие навески 5 г, но при этом необходимо дополнительное разбавление в 5 раз раствором алюмокалиевых квасцов по 2.2.2 или измерение с помощью ионоселективного электрода, на мембрану которого надевается гидратцеллюлозная пленка (такие электроды с пленкой прилагаются к прибору "Микон" = Мин-100).
    При анализе комбикормов с использованием нитратомеров 5 г навески разбавляют 45 см алюмокалиевых квасцов.
    2.3.1.2 Приготовление экстрактов свежих проб
    Из предварительно измельченной на терке или мезгообразователе пробы корнеклубнеплодов берут навеску массой 10 г, взвешенную с погрешностью не более 0,1 г. Навеску помещают в технологическую емкость вместимостью 100 или 200 см, приливают 50 см раствора алюмокалиевых квасцов и перемешивают с помощью мешалки в течение 3 мин. Перемешивание можно заменить гомогенизацией в течение 1 мин.
    Из предварительно измельченной ножницами пробы травянистых кормов берут навеску массой 10 г, взвешенную с погрешностью не более 0,1 г. Навеску помещают в стакан гомогенизатора, приливают 50 см раствора алюмокалиевых квасцов и гомогенизируют в течение 1-2 мин. При отсутствии гомогенизатора возможно измельченную массу с экстрагирующим раствором нагревать в кипящей водяной бане в течение 15 мин с последующим охлаждением и доведением до первоначального объема.
    При анализе трав семейства капустных (рапс, редька, горчица, свербига и т д.) или кормов, в которые одним из компонентов входят эти травы, (10±0,1) г измельченного материала помещают в технологическую емкость вместимостью 100-200 см, добавляют 50 см экстрагирующего раствора, приготовленного по 2.2.3, перемешивают с помощью мешалки в течение 3 мин. Затем при помешивании добавляют по каплям (1,0-0,5 см) 33%-ного раствора перекиси водорода до обесцвечивания раствора. В полученной суспензии измеряют концентрацию нитрат-ионов.
    Для сочных кормов с целью ускорения и снижения трудоемкости анализа возможно использование сока для анализа. Пробу, подготовленную для анализа, пропускают через соковыжималку. Полученный сок собирают в одну емкость и перемешивают. При анализе всех культур, кроме семейства капустных, отбирают пипеткой 10 см сока с погрешностью не более 0,1 см, помещают в технологическую емкость вместимостью 100-200 см, прибавляют 50 см раствора алюмокалиевых квасцов (2.2.2), перемешивают и в полученном растворе измеряют концентрацию нитрат-ионов.
    При анализе трав семейства капустных к (10±0,1) см сока, помещенного в технологическую емкость вместимостью 100-200 см, добавляют 50 см раствора алюмокалиевых квасцов (по 2.2.3). Раствор перемешивают и измеряют концентрацию нитрат
    -ионов.
    2.3.2 Концентрацию нитрат-ионов измеряют непосредственно в логарифмических единицах по шкале иономера, предварительно отградуированного по растворам сравнения, или в милливольтах с последующим определением значения единиц по градуировочному графику, построенному по результатам измерения ЭДС электродной пары в растворах сравнения, или на приборах, имеющих преобразователи значений концентрации нитрат-ионов в растворе в значения их концентрации в исследуемой продукции.
    Перед измерениями и после градуировки прибора электроды тщательно ополаскивают дистиллированной водой, промокают фильтровальной бумагой и погружают в испытуемые пробы. Показания прибора считают не менее чем через 1 мин после прекращения заметного дрейфа показаний прибора. При переходе от одной пробы к другой электроды ополаскивают дистиллированной водой и промокают фильтровальной бумагой. Температура анализируемых проб и растворов сравнения должна быть одинаковой. Настройку прибора проверяют по растворам сравнения не менее трех раз в течение рабочего дня, используя каждый раз свежие порции раствора сравнения. Перед каждой проверкой настройки иономера нитратный ионоселективный электрод выдерживают в растворе сравнения концентрации ()=0,0001 моль/дм в течение 3-4 мин.
    2.3.2.1 При непосредственном измерении концентрации нитрат-ионов в единицах прибор ежедневно настраивают в режиме "рХ" по растворам сравнения концентрации ()=0,0001 моль/дм (=4) и ()=0,01 моль/дм (=2), используя раствор ()=0,001 моль/дм для контроля. Отклонения значений от номинального значения не должны превышать 0,02 единицы .
    Массовую долю нитрат-ионов определяют по значениям растворов сравнения с помощью вспомогательных таблиц (см. приложение 1, табл
    ицы 2-8).
    2.3.2.2 При измерении концентрации нитрат-ионов в режиме "мВ" определение проводят, используя калибровочный график и снимая показания ЭДС в милливольтах.
    Содержание нитратов в пробах находят, используя калибровочный график, построенный на миллиметровой бумаге. По оси абсцисс откладывают значения , соответствующие растворам сравнения азотнокислого калия в молях:
    концентрации ()=0,1 моль/дм (=1);
    ()=0,01 моль/дм (=2);
    ()=0,001 моль/дм (=3);
    ()=0,0001 моль/дм (=4),
    по оси ординат - ЭДС, милливольт. По калибровочному графику находят значения и с помощью формул (3.4.1) или таблицы 2-8 приложение 1 определяют содержание нитрат-ионов (миллиграмм на килограмм) в исследуе
    мом объекте.
    2.3.2.3 При работе с приборами, имеющими преобразователи значения или моль/дм в значения концентрации нитрат-ионов в исследуемой продукции, настройку проводят непосредственно в единицах массовой доли нитрата в миллионных долях (мг/кг) по раствору известной концентрации с учетом разведения.
    Примечания
    1 При анализе кормов с очень низким содержанием нитратов необходимо дополнительно для построения калибровочного графика готовить раствор сравнения концентрации ()=0,00001 моль/дм (=5), при этом градуировочная кривая может отклоняться от прямой на 30-60°.
    2 При определении нитратов в комбикормах с добавками соли (хлористого натрия) следует в растворы сравнения ввести соответствующее количество хлористого натрия. При добавке соли в комбикорма в количестве 1% берут 1 г; 0,5% - 0,5 г; 0,2% - 0,2 г хлористого натрия. Навеску хлористого натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм, добавляют 10 г алюмокалиевых квасцов и растворяют в дистиллированной воде, доводя раствор до метки.
    Эти растворы используют вместо экстрагирующего при приготовлении растворов сравнения азотнокислого калия (2.2.5) для построения калибровочного графика
    .
    2.4 Обработка результатов
    2.4.1 При анализе проб, высушенных до воздушно-сухого состояния, массовую долю нитратов в испытуемом материале в миллионных долях (), млн (мг/кг), вычисляют по формуле
    ,
    где - объем экстрагирующего раствора, см;
    концентрации нитрата в вытяжке, моль/дм;
    62 - молярная масса иона NO, г;
    10 - коэффициент перевода долей единицы в миллионные доли;
    1000 - коэффициент перевода дм в см;
    - масса пробы, используемая для анализа, г.
    При разбавлении вытяжки результат анализа увеличивают во столько, во сколько раз была разбавлена вытяж
    ка.
    2.4.2 При анализе проб с естественной влажностью массовую долю нитратов в испытуемом материале в миллионных долях (), млн (мг/кг), вычисляют по формуле
    ,
    где - массовая доля воды в пробе, %;
    100 - коэффициент перевода процента в доли единиц;
    1 - плотность воды, г/см.
    2.4.3 Расчеты по приведенным уравнениям можно исключить, используя табл.2-8 приложения 1 для перевода значений в массовую долю нитрата в анализируемой пробе. Данные таблиц (4-8) приложения 1 составлены с учетом массовой доли влаги в различных кормах.
    2.4.4 За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
    Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений () и между двумя результатами, полученными в разных условиях (), мг/кг, при доверительной вероятности =0,95 при анализе воздушно-сухих проб не должны превышать следующих значений:
    ,
    ,
    где - среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений;
    - среднее арифметическое значение результатов двух определений, выполненных в разных условиях.
    Предельную погрешность результата анализа (), мг/кг, при односторонней доверительной вероятности =0,95 вычисляют по формуле
    .
    Предельную погрешность результата анализа используют при оценке качества кормов.
    Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии исследуемых проб стандартных образцов (СО). В этом случае (при обязательном проведении выборочного статистического контроля сходимости параллельных определений) за результат испытания принимают результат единичного определения, если разница между воспроизведенной и аттестованной в СО массовой долей нитратов (), мг/кг, не превышает следующего значения
    ,
    где - аттестованное значение содержания нитратов в СО, взятое из свидетельства.
    Контрольные анализы образцов исследуемой партии и анализы СО проводят в двух параллельных определениях в соответствии с утвержденной нормативно-технической документацией.
    При анализе свежих проб .
    3 Фотометрический метод определения нитритов и нитратов после восстановления кадмием
    Сущность метода заключается в извлечении нитратов и нитритов раствором хлористого кадмия и бария, осветлении экстракта в щелочной среде и фотометрическом определении нитритов в виде окрашенного соединения, образующегося при их взаимодействии с сульфаниламидом и N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлоридом. Сумму нитратов и нитритов определяют после восстановления нитратов до нитритов на кадмиевой колонке. Содержание нитратов получают путем вычитания из суммы нитратов и нитритов содержание нитритов в продукте.
    Кадмий и его соли ядовиты, все процедуры с их использованием должны проводиться в вытяжном шкафу.
    3.1 Аппаратура, материалы и реактивы
    Весы лабораторные 2-го класса точности с пределом взвешивания 200 г и 3-го и 4-го классов точности с пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
    Гомогенизатор.
    Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр.
    рН-метр.
    Колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см по ГОСТ 1770.
    Цилиндры мерные вместимостью 25, 100, 500 см по ГОСТ 1770.
    Пипетки градуированные вместимостью 5, 10 см.
    Колонка редуцирующая (см. рисунок 1).

    1 - резервуар вместимостью 50 см; 2 - колонка с кадмием;
    3 - стекловата; 4 - кран
    Рисунок 1
    Стаканы химические вместимостью 250 см по ГОСТ 1770.
    Колбы конические с широким горлом вместимостью 250 см по ГОСТ 25336.
    Воронки стеклянные диаметром 36-56 мм по ГОСТ 25336.
    Пробки стеклянные или резиновые.
    Микробюретка вместимостью 2 и 10 см.
    Палочка стеклянная с тефлоновой или такой же по качеству другой пластмассовой трубкой на конце.
    Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч.
    Кадмий сернокислый по ГОСТ 4456, х. ч.
    Кадмий хлористый по ГОСТ 4330, х. ч.
    Медь сернокислая по ГОСТ 4165, х. ч.
    Аммоний хлористый по ГОСТ 3773, х. ч.
    Барий хлористый по ГОСТ 4108, х. ч.
    Аммония гидроокись по ГОСТ 3760, х. ч.
    Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.
    Соль динатриевая этилендиамин-N', N', N', N'-тетрауксусной кислоты по ГОСТ 10652, х. ч.
    Сульфаниламид (белый стрептоцид, не растворимый в воде).
    N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорид, ч.
    Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197, х. ч.
    Калий азотнокислый по ГОСТ 4217, х. ч.
    Цинк в форме палочек длиной около 150 мм и диаметром 5-7 мм.
    Вата стеклянная.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
    3.2.Подготовка к испытанию
    3.2.1 Подготовка проб к испытанию - по п.2.2.
    3.2.2 Приготовление экстрагирующего раствора
    50 г кадмия хлористого и 50 г бария хлористого растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см в дистиллированной воде и доливают водой до метки. Устанавливают рН-1 соляной кислотой.
    3.2.3 Приготовление буферного раствора с рН 9, 6-9, 7
    50 г аммония хлористого растворяют в 500 см дистиллированной воды. Устанавливают рН раствора гидроокисью аммония и объем раствора доводят до 1000 см дистиллированной водой.
    3.2.4 Приготовление раствора гидроокиси натрия концентрации 2,5 моль/дм
    100 г гидроокиси натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см в дистиллированной воде и доливают до метки водой.
    3.2.5 Приготовление раствора соляной кислоты (НСl)=2 моль/дм и (НСl)=0,1 моль/дм
    172 см концентрированной соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой до 1000 см.
    8,6 см концентрированной соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой до 1000 см
    .
    3.2.6 Приготовление раствора динатриевой соли этилендиамин-N', N', N', N' - тетрауксусной кислоты (трилона Б)
    33,5 г трилона Б растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см и доливают водой до метки.
    3.2.7 Приготовление раствора сульфаниламида
    1,25 г сульфаниламида растворяют в 250 см соляной кислоты, разбавленной дистиллированной водой 1:1. Раствор устойчив в течение 1-2 мес.
    3.2.8 Приготовление раствора N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида
    0,1 г N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см и доливают до метки водой. Раствор хранят в плотно закрывающейся склянке из темного стекла в холодильнике. Устойчив в течение 1-2 недель.
    3.2.9 Приготовление раствора азотистокислого натрия
    0,15 г азотистокислого натрия, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 110-120 °С, растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см и доводят до метки водой. Получают основной раствор. Для приготовления рабочего раствора, содержащего 1 мкг NO в 1 см, к 10 см основного раствора добавляют 20 см буферного раствора, приготовленного по 3.2.3, и доводят объем раствора в мерной колбе вместимостью 1000 см водой до метки.
    3.2.10 Приготовление раствора азотнокислого калия
    0,734 г азотнокислого калия, предварительно высушенного при температуре 110-120 °С до постоянной массы, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см и доводят до метки водой. Получают основной раствор. Для приготовления рабочего раствора к 5 см основного раствора добавляют 20 см буферного раствора, приготовленного по п.3.2.3, и доводят объем водой до метки в мерной колбе вместимостью 1000 см. Раствор содержит 4,5 мкг NO в 1 см.
    3.2.11 Приготовление раствора сернокислого кадмия массовой концентрации 20%
    200 г сернокислого кадмия растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см и доливают до метки водой.
    3.2.12 Построение градуировочного графика
    В мерные колбы вместимостью 100 см приливают из пипетки (или бюретки) 0; 2; 12; 20; 30; 40 см рабочего раствора азотистокислого натрия, доводят объем до 60 см водой. Окрашивают и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов, как указано в 3.3.3. По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс значения массовой концентрации нитритов в микрограммах 100 см фотометрируемого раствора, а на оси ординат - соответствующие им значения оптической плотности.
    3.2.13 Приготовление кадмиевой колонки
    3.2.13.1 Приготовление гранулированного кадмия диаметром гранул 0,3-0,8 мм
    В химический стакан вместимостью 250 см наливают 200 см 20%-ного раствора сернокислого кадмия, опускают в него палочки цинка и выдерживают в течение 24 ч, периодически снимая выделяющую кадмиевую губку стеклянной палочкой с тефлоновой трубкой. После того, как выделение кадмия прекратится, вынимают палочки и сливают жидкость с кадмиевой губки настолько, чтобы она лишь покрывала кадмий. Кадмий в стакане два-три раза промывают декантацией дистиллированной водой, затем переносят при помощи 400 см раствора соляной кислоты (НСl)=0,1 моль/дм в гомогенизатор и измельчают в течение 10 с. После этого снова переносят в химический стакан и оставляют на несколько часов, периодически перемешивая стеклянной палочкой, чтобы удалить пузырьки воздуха. Затем кадмий переносят в коническую колбу вместимостью 250 см, жидкость декантируют и добавляют такое количество раствора соляной кислоты (НСl)=2 моль/дм, чтобы она покрыла гранулят, круговым движением несколько раз поворачивают колбу, дают кадмию осесть и промывают его дистиллированной водой до исчезновения следов хлорида. Добавляют раствор сернокислой меди из расчета 2,5 см на 1 г кадмия, вращая колбу течение 1 мин кругообразным движением. Затем сливают раствор и немедленно начинают промывание кадмия декантацией дистиллированной водой. Промывание повторяют, следя за тем, чтобы кадмий все время был покрыт вод
    ой.
    3.2.13.2 Приготовление кадмиевой колонки
    На дно редуцирующей колонки помещают стеклянную вату слоем около 2 см, заполняют водой и затем переносят кадмий, следя за тем, чтобы он как можно меньше соприкасался с воздухом. Высота заряда должна достигать 15-20 см. Необходимо следить за тем, чтобы в слое стеклянной ваты и между частицами кадмия не оставались пузырьки воздуха и столбик кадмия был постоянно покрыт жидкостью.
    Через свежезаправленный кадмиевый столбик пропускают смесь, состоящую из 750 см дистиллированной воды, 225 см рабочего раствора азотнокислого калия, 20 см буферного раствора и 20 см раствора трилона Б со скоростью 6 см/мин, после чего промывают водой до полного удаления нитритов.
    3.2.13.3 Проверка редуцирующей способности кадмиевой колонки
    Редуцирующую способность колонки проверяют до и после проведения серии анализов. Для этого в приемник колонки вводят 20 см рабочего раствора азотнокислого калия и добавляют 5 см буферного раствора. Скорость прохождения раствора через столбик должна быть 6 см/мин. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 см. Как только приемник опорожнится, дважды смывают стенки 15 см дистиллированной воды и наполняют его водой.
    Элюат в мерной колбе вместимостью 100 см доливают до метки водой и взбалтывают.
    Отбирают 20 см элюата, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доливают до 60 см водой, окрашивают и измеряют оптическую плотность, как указано в 3.3.3.
    По градуировочному графику находят массовую концентрацию нитритов в разбавленном элюате и определяют редуцирующую способность колонки. Если она ниже 90%, колонку следует регенерирова
    ть.
    3.2.13.4 Регенерирующие колонки
    5 см раствора трилона Б и 2 см раствора (HCl)=0,1 моль/дм разбавляют водой до 100 см и пропускают через колонку, затем промывают колонку водой.,
    3.3 Проведение испытания
    3.3.1 Приготовление экстрактов
    3.3.1.1 Навеску сухих проб массой 1-2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,001 г, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, добавляют 40 см экстрагирующего раствора, 40 см воды, взбалтывают и оставляют на 1 ч, периодически перемешивая. При использовании ротатора или электромеханической мешалки достаточно перемешивание в течение 3-5 мин.
    К суспензии пробы добавляют 8 см раствора (NaOH)=2,5 моль/дм, доливают до метки водой и немедленно фильтруют через быстрофильтрующую бумагу.
    3.3.1.2 Из предварительно измельченной на терке или мезгообразователе пробы корнеклубнеплодов берут навеску массой 5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см и обрабатывают, как указано в 3.3.1.1.
    Из предварительно измельченной ножницами пробы травянистых кормов берут навеску массой 5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, измельчают на гомогенизаторе. При отсутствии гомогенизатора навеску пробы с экстрагирующим раствором помещают на кипящую водяную баню на 15 мин и далее обрабатывают, как указано в 3.3.1.1.
    3.3.2 Восстановление нитрата в нитрит
    Перед началом работы и после каждого анализа кадмиевую колонку промывают 25 см (НСl)=0,1 моль/дм, затем 50 см дистиллированной воды и 25 см буферного раствора, разбавленного водой 1:9 и 50 см воды. Для восстановления нитратов в нитриты переносят в приемник колонки 25 см фильтрата и одновременно 5 см буферного раствора и пропускают через колонку со скоростью 6 см/мин. Необходимо обеспечить воспроизводимость скорости протекания жидкости через колонку. Скорость должна быть постоянной (±0,1 см) для образцов и стандартных растворов. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 см. Для каждой серии определений проводят контрольный опыт, применяя вместо фильтрата раствор, при приготовлении которого использованы все реактивы в применяемой концентрации, но без испытуемой пробы.
    Когда приемник колонки почти опорожнится, дважды смывают его стенки круговым движением воды по 15 см и заливают его водой. Когда соберется около 100 см элюата, колбу удаляют из-под колонки, доливают до метки водой и взбал
    тывают.
    3.3.3 Окрашивание растворов и измерение оптической плотности окрашенных растворов
    В зависимости от ожидаемого содержания нитритов и нитратов переносят от 1 до 60 см фильтрата или элюата в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят объем до 60 см водой. Затем в колбу вносят 10 см раствора сульфаниламида, тщательно перемешивают и оставляют стоять на 5 мин при комнатной температуре, защитив от прямого солнечного света. Добавляют 2 см раствора N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида, тщательно перемешивают и оставляют на 10-20 мин при комнатной температуре в темном месте. Доливают дистиллированной водой до метки, перемешивают и измеряют оптическую плотность по отношению к контрольному раствору в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см при длине волны, дающей максимальное поглощение на данном приборе (около 530 нм).
    Примечание - Поскольку фильтрат испытуемого раствора не бывает абсолютно бесцветным, измеряют оптическую плотность фильтрата и элюата с эквивалентным разбавлением без добавления окрашивающих растворов и вносят поправку на полученное значение оптической плотности.
    Допускается окрашивание растворов по методу, указанному в приложении 2, при анализе свежих проб.
    3.4 Обработка результатов
    3.4.1 Массовую долю нитритов в испытуемой пробе в миллионных долях (), млн (мг/кг), вычисляют по формуле
    ,
    где - масса NOв 100 см фотометрируемого раствора, найденная по градуировочному графику, мкг;
    - общий объем экстракта, см;
    - объем экстракта, используемый для окрашивания, см;
    - масса пробы, г
    .
    3.4.2 Массовую долю нитратов в испытуемой пробе в миллионных долях (), млн (мг/кг), вычисляют по формуле
    ,
    где - масса NO в 100 см фотометрируемого раствора, найденная по градуировочному графику, мкг;
    - общий объем экстракта, см;
    - объем элюата, используемый для окрашивания, см;
    - объем экстракта, используемый для восстановления на колонке, см;
    - объем элюата после восстановления, см;
    - масса пробы, г;
    - массовая доля нитритов в пробе, мг/кг;
    1,3478 - коэффициент пересчета нитритов в н
    итраты.
    3.4.3 За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
    Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений и между двумя результатами, полученными в разных условиях, не должны превышать 10 и 30% относительно среднего арифметического результата соответственно.
    4 Фотометрический метод определения содержания нитритов
    Сущность метода заключается в извлечении нитритов раствором хлористого калия (КСl)=1 моль/дм при соотношении пробы и экстрагента 1:50 для сухих и 1:10 для влажных проб и последующем фотометрическом определении нитритов в виде окрашенного соединения, образующегося при взаимодействии с сульфаниламидом и N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлоридом.
    4.1 Аппаратура, реактивы и материалы
    Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
    Фотоэлектроколориметр.
    Центрифуги лабораторные марки ЦЛС-8 или ЦЛН-2.
    Встряхиватель, ротатор.
    Дозаторы (шприцы медицинские) вместимостью 1, 4 и 50 см.
    Цилиндры мерные вместимостью 100 см по ГОСТ 1770.
    Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 см по ГОСТ 1770.
    Колбы плоскодонные вместимостью 250 см.
    Пробирки вместимостью 20 см по ГОСТ 10515.
    Пипетки вместимостью 10 см.
    Микропипетки.
    Воронки стеклянные по ГОСТ 8613.
    Калий хлористый по ГОСТ 4234, х. ч.
    Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197, х. ч.
    Цинк сернокислый по ГОСТ 4174, ч. д. а.
    Калий железистосинеродистый (желтая кровяная соль) по ГОСТ 4207, ч. д. а.
    Свинец уксуснокислый по ГОСТ 1027, х. ч.
    Уголь активный, осветляющий марки ОУ-Б по ГОСТ 4453.
    Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.
    N-этил-1-нафтиламин гидрохлорид, ч., или
    Нафтиламин-альфа по ГОСТ 8827, ч. д. а., или
    Н-(1-нафтил)-этилендиамин дигидрохлорид, ч.
    Сульфаниламид (белый стрептоцид, не растворимый в воде).
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
    4.2 Подготовка к испытанию
    4.2.1 Подготовка проб к испытанию - по 2.2.1.
    4.2.2 Приготовление стандартного раствора азотисто-кислого натрия (основной раствор)
    0,150 г азотисто-кислого натрия, высушенного до постоянной массы при температуре 100-105 °С, растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см дистиллированной водой и доводят объем раствора водой до метки. 1 см полученного раствора содержит 0,1 мг нитрита.
    4.2.3 Построение калибровочного графика
    Рабочий стандартный раствор (0,01 мг NO/см), готовят десятикратным разбавлением основного стандартного раствора раствором хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм. Получают раствор, содержащий 10 мкг нитрита в 1 см.
    Для построения калибровочного графика готовят серию растворов сравнения из рабочего стандартного раствора. Для этого в мерные колбы вместимостью 100 см приливают из микропипетки объемы рабочего стандартного раствора, указанные в таблице 1.
    Таблица 1
    Номер колбы Объем рабочего стандартного раствора, см Массовая доля нитритов, мг/кг
    при соотношении пробы и экстрагента 1:50 при соотношении пробы и экстрагента 1:40 (для комбикормов) при соотношении пробы и экстрагента 1:10
    1 0 0 0 0
    2 0,5 2,5 2 0,5
    3 1 5 4 1
    4 2 10 8 2
    5 4 20 16 4
    6 8 40 32 8
    7 10 50 40 10
    8 15 75 60 15

    Объемы растворов в каждой колбе доводят до метки раствором хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм и перемешивают.
    Затем из каждой колбы отбирают в пробирки по 4 см растворов сравнения, прибавляют по 1 см окрашивающего реактива, перемешивают и выдерживают 10 мин.
    По истечении указанного времени измеряют оптическую плотность окрашенных растворов при зеленом светофильтре с длиной волны 520 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см.
    По полученным данным строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс значения содержания нитритов, мг/кг, по оси ординат - соответствующие им показатели оптических плотностей.
    4.2.4 Приготовление раствора хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм
    75 г хлористого калия взвешивают с погрешностью не более 0,01 г и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см дистиллированной водой и доливают до метки водой. рН раствора доводят до 5,6-6,0, используя 10%-ные растворы соляной кислоты или гидроокиси калия.
    4.2.5 Приготовление раствора уксуснокислого свинца
    100 г уксуснокислого свинца взвешивают с погрешностью не более 0,01 г и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см дистиллированной водой и доливают до метки водой.
    4.2.6 Приготовление раствора железистосинеродистого калия
    150 г соли растворяют в 850 см дистиллированной воды.
    4.2.7 Приготовление раствора сернокислого цинка
    300 г соли растворяют в 700 см дистиллированной воды.
    4.2.8 Приготовление окрашивающего раствора
    В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 250 см дистиллированной воды, прибавляют 100 cм ортофосфорной кислоты, перемешивают, добавляют 5 г хорошо растертого порошка сульфаниламида, и 1 г N-этил-1-нафтиламин гидрохлорида или альфанафтиламина, взбалтывают на встряхивателе до полного растворения и доводят объем дистиллированной водой до метки.
    Раствор хранят в посуде из темного стекла в холодильнике в течение не более 1 мес.
    4.3 Проведение испытания
    4.3.1 Приготовление экстракта
    Навеску сухих проб растительных кормов массой 1 г взвешивают с погрешностью не более 0,01 г, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, приливают 49 см раствора хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм, 1 см раствора уксуснокислого свинца и добавляют 0,4 г угля, закрывают пробкой и взбалтывают на ротаторе в течение 3 мин. Затем суспензию фильтруют через плотный бумажный или двойной простой фильтр.
    При анализе свежих проб корнеклубнеплодов, силоса и сенажа предварительно измельченную навеску массой 10 г, взвешенную с погрешностью не более 0,1 г, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, приливают 50 см раствора хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм, добавляют 1 см раствора уксуснокислого свинца, 0,4 г угля и взбалтывают в течение 10 мин. Затем колбу доливают до метки раствором хлористого калия, перемешивают и фильтруют.
    При анализе свежих проб кормовых трав навеску массой 10 г переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, приливают 50 см раствора хлористого калия и помещают на кипящую водяную баню на 15 мин. После охлаждения раствора добавляют 1 см раствора уксуснокислого свинца, 0,4 г угля, доливают до метки раствором хлористого калия, тщательно перемешивают и фильтруют.
    При анализе комбикормов и комбикормового сырья навеску массой 5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 см. Приливают 70 см раствора хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм и встряхивают в течение 3 мин, содержимое переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 5000 мин-7 мин. Центрифугат фильтруют в мерные колбы вместимостью 100 см. Осадок в пробирке промывают 15-20 см раствора хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм и переносят на фильтр. Фильтрат в мерных колбах доводят до метки раствором хлористого калия (КСl)=1,0 моль/дм. 50 см фильтрата переносят в центрифужную пробирку и добавляют 25 см раствора железистосинеродистого калия и 25 см раствора сернокислого цинка. Тщательно перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют 7 мин при 5000 мин. Центрифугат фильтруют и используют для определения нитритов. Если фильтрат получается окрашенным, к нему прибавляют 0,4 г активированного угля, взбалтывают и фильтруют
    через плотный фильтр.
    4.3.2 Окрашивание растворов и измерение оптической плотности
    В пробирку шприц-дозатором или пипеткой отбирают 4 см фильтрата и добавляют 1 см окрашивающего раствора. Через 10 мин измеряют оптическую плотность окрашенного раствора по 4.2.3.
    При анализе свежих проб допускается окрашивание растворов по методу, указанному в приложении 2.
    4.4 Обработка результатов
    Массовую долю нитритов в испытуемой пробе, млн или мг/кг, находят по калибровочному графику (см. 4.2.3).
    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
    Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений () и между двумя результатами, полученными в разных условиях (), мг/кг, при доверительной вероятности =0,95 не должны превышать следующих значений:
    ;
    ,
    где - среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений;
    - среднее арифметическое значение результатов двух определений, выполненных в разных условиях.